不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定

　　2.3 样品处理与刺五加苷E的提取刺五加植株洗净，根和茎分开，阴干后将根和茎分别切成薄片，置于烘箱中60℃烘干至恒重后粉碎，粉末过20目筛。实验比较了两种提取方法——回流提取法和超声提取法：精确称取刺五加根和茎的粉末2.5 g各2份，一份用50%的甲醇溶液85℃回流提取2 h后过滤，滤液用旋转蒸发仪蒸干，残渣用50%甲醇溶解转移至10 ml容量瓶中定容;另一份超声(频率40 kHz，功率100 W，温度40℃)提取40 min，然后过滤、滤液蒸干并按同法配成溶液。HPLC测定刺五加苷E的含量。通过比较，发现二者提取效果相差不大，但由于超声提取法速简便，因此本研究采用超声提取方法。

　　2.4 线性关系考察精密吸取不同浓度的对照品溶液20 μl，HPLC测定刺五加苷E的峰面积。采用Origin 7.0数据处理软件，以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，得到直线拟合方程为 Y = 1 920.529 25 X + 250.707 22，r = 0.999 92，在所测量的范围内(0.625～10.004 μg)，线性关系理想。

　　2.5 精密度实验 精密吸取刺五加苷E的对照品溶液20 μl，连续进样5次，测定其峰面积;得到RSD为1.02%，精密度良好。

　　2.6 稳定性实验 精密吸取刺五加根样品(本溪产)溶液20 μl，每隔2 h进样1次，连续测定6次，测定刺五加苷E的含量，计算RSD= 1.07%，表明在10 h内刺五加苷E稳定性良好。

　　2.7 重复性实验精密称取1.0 g刺五加根(本溪产)粉末6份，按“2.3”中超声提取法制备供试品溶液。测定结果的RSD为2.03%，重复性较好。

　　2.8 加样回收率实验精密称取1.0 g刺五加茎(本溪产)粉末5份，精密加入一定量刺五加苷E对照品，然后按照“2.3”中超声提取法制备供试品溶液。经测定，平均回收率为100.64%，RSD= 2.97%，回收率较好。

　　2.9 样品测定精密称取各样品药材粉末2.5 g，按照“2.3”中超声提取法提取各样品中的刺五加苷E，并测定其含量。测定结果见表1。表1 刺五加中刺五加苷E的测定

　　3 讨论

　　本研究比较了超声提取和回流提取两种方法对刺五加中的刺五加苷E的提取效果，发现回流提取法提取率略高于超声提取法，但两者相差不大。由于回流提取法操作繁琐、耗时较长，而超声提取法简便快速，适用于对大量样品进行提取和分析。

　　在流动相的选择中，曾比较了不同比例的0.1 %磷酸水溶液-乙腈，还进行了梯度混合条件的摸索，最终确定为0.1 %磷酸水溶液-乙腈(89∶11)。在此条件下样品中刺五加苷E的色谱峰与周围色谱峰分离度较好。

　　本研究建立的刺五加苷E的HPLC测定方法，简便快速，稳定可靠，重现性好，回收率高。研究发现5个产地的刺五加中，根中的刺五加苷E含量均高于茎;产地不同，刺五加苷E含量也存在一定的差异：根中刺五加苷E的含量以集安产区最高，而茎中刺五加苷E的含量以柳河产区最高;珲春产区刺五加苷E的含量显著低于其它产区。今后应当进一步研究珲春与其它产区的刺五加在遗传学上是否存在着显著差异，特别是在刺五加合成基因簇和关键酶基因上的差异，以便找出影响刺五加苷合成的遗传学因素，为进一步采用代谢工程手段改造刺五加苷生物合成基因、提高刺五加植株或细胞培养时刺五加苷的含量提供基础。

【参考文献】
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