甘草中角鲨烯高效液相色谱法测定

               作者：梁新华，郑彩霞，张风侠

【摘要】  目的对甘草中是否存在角鲨烯进行考察。方法以石油醚为溶剂索氏提取，高效液相色谱法(HPLC)定量分析测试甘草种子、根中角鲨烯。结果甘草种子、甘草根中存在角鲨烯，但含量较低。本实验中所采用的HPLC法测定角鲨烯方法是可行的,确定的色谱条件为：Waters Corporation C18，流动相：乙腈∶甲醇=60∶40，检测波长为210 nm，流速为2.0 ml/min，柱温为30℃。结论角鲨烯可以考虑作为甘草中一种新的具有高开发利用价值的物质予以深层次开发利用。

【关键词】  甘草; 角鲨烯; 提取; 高效液相色谱

　　Abstract：ObjectiveTo determine squalene in Glycyrrhiza uralensis Fisch by HPLC.

　　MethodsThe oil in root and seed of Glycyrrhiza uralensis Fisch. was extracted by Soxhlets extractor with petrolether, squalene was separated by TLC and HPLC.

　　ResultsThe content of squalene in Glycyrrhiza uralensis Fisch. was low (in olive and palm about 1.16%).HPLC established in this thesis was suitable to analyze squalene, the HPLC conditions were as follows: column: Waters Corporation C18 column; mobile phase,V(acetonitrile)∶V(methanol)=60∶40; detection wavelength,210nm; flow rate,2ml/min; temperature,30℃.

　　ConclusionThe determination method of aqualene in Glycyrrhiza uralensis Fish was established.

　　Key words： Glycyrrhiza uralensis Fisch.; Squalene; Extraction; HPLC

　　甘草Glycyrrhiza uralensis为常用大宗药材，以根及根茎入药，素有“十方九草”之称。前人的研究多集中于甘草药理作用、化学成分分析、规范化种植等方面。在对甘草中主要药理成分甘草酸生物合成的的相关研究中，初步发现甘草中含有角鲨烯。角鲨烯最初是从鲨鱼的肝油中发现的，1914年被命名为Squalene，其化学名称为2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯，属开链三萜，又称鱼肝油萜，也称鲨烯[1]，具有增强体质和抗疲劳作用，可用于肝病治疗，并具有一定的抗癌、防癌及保湿养颜作用[2～4]，因此广泛用于医疗保健品和化妆品等方面。目前关于角鲨烯的分析检测多采用气相色谱法[5～11]，需要甲基化进行衍生预处理。本文在前人研究的基础上对甘草根油中的角鲨烯进行了高效液相色谱测试方法的研究。现报道如下。

　　1 材料与仪器

　　1.1 材料人工栽培乌拉尔甘草(2年生)于2008-06-24采自宁夏盐池县惠安堡镇，经本院王俊教授鉴定为乌拉尔甘草。同时于当年11月采集乌拉尔甘草种子。

　　1.2 试剂甲醇、乙腈均为色谱纯，石油醚(60～90℃)、氯仿均为分析纯。角鲨烯标准品(Sigma)，纯度98%。

　　1.3 仪器Agilent(美国) 1100高效液相色谱仪，VWD紫外检测器，10 μl 微量进样器，色谱柱：Waters Corporation C18;RE-52B型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

　　2 方法与结果

　　2.1 标准溶液的配制吸取角鲨烯标准品原液6.25 μl于25 ml容量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，即得浓度为0.214 mg/ml的标准品溶液。

　　2.2 样品的制备采用索式提取法对甘草根进行提取：称取过40目筛的甘草根粉末20 g用滤纸包裹装入索式提取器内，同时控制水浴温度恒定为75℃，加入200 ml石油醚回流提取至油脂完全溶于石油醚中。取石油醚提取液用旋转蒸发仪旋转蒸发，至无石油醚为止，得黄色甘草根油0.5 g，用三氯甲烷定容至10 ml。0.45μm微孔滤膜滤过，得甘草根油供试液。同法，以甘草种子为提取材料，分为去皮和未去皮，制得金黄色甘草种油，定容，过0.45 μm微孔滤膜，即得甘草种油供试液。

　　2.3 波长的选择 以三氯甲烷为参比，将用三氯甲烷稀释后的甘草根油用双光束紫外分光光度计从190～700 nm波长范围内进行扫描。紫外光谱显示甘草根油在210，286 nm处有两个最大吸收峰。而角鲨烯结构是孤立双键，因此不会在286 nm处有强吸收，故210 nm处应为角鲨烯的最大吸收波长，因此检测波长定在210 nm。

　　2.4 提取溶剂的选择由于油脂极性较小，且角鲨烯是不饱和烃类化合物，因此分别选择石油醚、三氯甲烷两种溶剂为提取剂。实验结果表明，用石油醚作提取剂时所得油脂量高于用三氯甲烷的，因此，实验选用石油醚为提取剂。

　　2.5 流动相的选择角鲨烯为不饱和烃类化合物，可选用反相色谱对其进行分离，参照陈全斌[12]方法，选用乙腈/甲醇为流动相，比例为乙腈/甲醇=60/40，选用“2.3”项确定的检测波长210 nm，先后按照流速2.0，1.0 ml/min，柱温20℃，30℃进样分析，发现甘草根油样品中各组分在液相条件为乙腈/甲醇=60/40，检测波长210 nm，流速2.0 ml/min，柱温30℃时有较好的分离效果，色谱图如图1所示。取标准溶液10 μl进样，按前述同一色谱条件分析，色谱图见图2。说明在上述色谱条件下标准溶液和样品待测液中角鲨烯得到充分分离，角鲨烯保留时间为15.5 min左右。样品与标准液中角鲨烯保留时间一致。图1 角鲨烯样品色谱图 图2 角鲨烯标准品色谱图