不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定
作者：吴少杰，邢朝斌，劳凤云，赵宝瑞
【摘要】 目的建立刺五加中刺五加苷E含量的测定方法，并比较不同产地的刺五加中刺五加苷E含量，为进一步研究不同品系的刺五加中刺五加苷E的含量与其遗传学的关系奠定基础。方法刺五加苷E的提取采用超声提取法;选用YMC ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)，检测波长220 nm，以0.1%磷酸水溶液-乙腈(89∶11)为流动相，体积流量1.0 ml/min。结果超声波提取法对刺五加苷E提取率稍低于溶剂提取法，但操作简便，耗时较短。刺五加苷E的线性范围为0.625～10.004 μg(r = 0.999 92);平均回收率为100.64%，RSD为2.97%。结论建立的刺五加苷E提取和测定方法适合于快速准确地分析大量样品。
【关键词】 刺五加; 刺五加苷E; 高效液相色谱法
Abstract：Objective To establish a method for determination of Eleutheroside E content in Eleutherococcus senticosus from different provenances, which will afford a base for further research on the relationship between the heritage of Eleutherococcus senticosus and the content of Eleutheroside E.
MethodsA supersonic extraction method was adopted for the extraction of Eleutheroside E.HPLC determination conditions were as follows:YMC ODS column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), water containing 0.1% phosphoric acid and acetonitrile (89∶11) as mobile phase, with a flow rate of 1.0 ml/min, and UV detect wavelength 220 nm.
ResultsAs compared with organic solvent extraction method, supersonic extracting method was easy and time-saving, despite its slightly low extracting rate. The linear range of Eleutheroside E was 0.625-10.004 μg (r = 0.999 92),average recovery coefficient was 100.64%, RSD = 2.97%.
ConclusionThe determination method is suitable for the precisely analysis of Eleutheroside E.
Key words：Eleutherococcus senticosus; Eleutheroside E; HPLC
剌五加为五加科植物刺五加Eleutherococcus senticosus的干燥根、茎及根茎。《本草纲目》记载“刺五加能补力益精，明目下气”，“能补五劳七伤，久服轻身耐老”;具有益气健脾、补肾安神之功[1] 。现代药理证明，刺五加能增强人体的抗疲劳及适应性、防辐射、调节免疫功能及抗癌等作用[2] 。其主要成分为紫丁香苷、刺五加苷和异秦皮啶等[3]。
刺五加在我国东北和华北北部均有分布，作者发现不同产地的刺五加之间在遗传学上存在着一定的差异[4]，目前正在研究这些遗传学差异与刺五加苷E生物合成的关系。本研究试图建立刺五加苷E的测定方法并比较不同产地、不同部位的刺五加中刺五加苷E含量的高低，为进一步研究刺五加苷含量差异与其遗传学差异的关系提供基础。
1 设备与材料
1.1 仪器HP-1100高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司生产)，四元泵，紫外检测器，HP色谱工作站;KDC-16H高速台式离心机;RE-52ZZ旋转蒸发仪(上海亚荣仪器厂);万分之一电子天平(上海亚荣仪器厂);KQ3200DV型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2 药材与对照品刺五加苷E对照品，购自中国药品生物制品检定所。
药材采自吉林梅河口、柳河、集安、珲春和辽宁本溪，经华北煤炭医学院药学系韩刚教授鉴定，为五加科植物刺五加E. senticosus (Rupr. et Maxim.) Harms。
1.3 试剂磷酸(天津市微通化学试剂有限公司)，色谱纯乙腈(天津市四友生物医学技术有限公司出品，高效液相色谱专用)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 YMC ODS液相色谱柱 (150 mm× 4.6 mm, 5 μm);柱温30℃，检测波长220 nm，体积流量1.0 ml/min，流动相为0.1 %磷酸水溶液-乙腈(89∶11)。此条件下，样品中刺五加苷E与两侧相邻色谱峰的分离度分别为2.94和2.98，分离效果良好;对刺五加苷E分离的理论塔板数为2.14 × 104，色谱图见图1。*- 刺五加苷E图1 刺五加苷E对照品(A)和刺五加(B)的HPLC图
2.2 对照品溶液配制精密称取0.5 mg对照品，用50%甲醇定容至10 ml，于4℃冰箱中保存。精密吸取一定量上述溶液置于另一10 ml容量瓶中并用50%的甲醇定容;按照此方法依次配制不同浓度的的刺五加苷E标准溶液。