哮喘宁合百令胶囊治疗哮喘的作用机理研究

【摘要】  目的探讨哮喘宁合百令胶囊治疗哮喘的作用机制。方法酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定大鼠哮喘急性期细胞因子白介素-4(IL-4)，白介素-5(IL-5)，干扰素-γ(IFN-γ),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量，用t检验进行统计分析。结果哮喘宁合百令胶囊对大鼠哮喘急性期细胞因子IL-4，IL-5，IFN-γ，TNF-α的含量有显著的影响。结论哮喘宁合百令胶囊有显著的改善大鼠哮喘急性期细胞因子指标的作用。

【关键词】  哮喘宁; 百令胶囊; 哮喘; 细胞因子

　哮喘宁是三拗汤加味而成，由麻黄、杏仁、射干、半夏、甘草、生石膏、桑白皮、黄芩等中药组成，具有宣通肺气、止咳平喘的作用，用于支气管哮喘，咳嗽，老年痰喘等治疗。

　　支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞(EOS)、肥大细胞(MC)、T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的慢性气道炎症。而这些炎症细胞的增殖、生长、分化、移行、聚集、浸润、活化与其自身分泌的细胞因子息息相关。

　　本研究观察细胞因子IL-4，IL-5，IFN-γ,TNF-α含量的差异，通过哮喘宁合百令胶囊干预哮喘大鼠血清中IL-4，IL-5，IFN-γ,TNF-α含量的影响来探讨哮喘宁合百令胶囊对Th1/Th2的调控作用及防治哮喘的作用。

　　1 材料与仪器

　　1.1 动物雄性SD大鼠60只(7～8周龄)，体质量(200±10)g，中南大学实验动物中心，动物合格证号：医动字：08-005。

　　1.2 试剂大鼠IL-4，IL-5，IFN-r,TNF-ɑ试剂盒均购自尚柏生物医学技术北京有限公司。哮喘宁(自制);百令胶囊，国药准字Z10910036，030809;0.2 g/粒，30粒装，杭州中美华东制药有限公司产品。卵蛋白(OVA)，华美生物工程公司。百日咳杆菌，湖南省药品生物制品检验所产品，含量，1.04×1011个/ml;地塞米松片，0.75 mg/片，030605，海南制药厂有限公司产品。

　　1.3 仪器酶标仪(BIO-RAD,250，美国)，微量进样器，TBL型低温高速离心机，-80℃冰箱;YWQ-1型多功能小型医用雾化器，天津建隆电子有限公司产品。

　　2 方法

　　2.1 分组50只大鼠随机分成5组，即正常对照组、模型组、哮喘宁合百令胶囊组、哮喘宁组、地塞米松组，各组均为10只。

　　2.2 动物造模哮喘模型参照吕国平等[1]介绍的方法，分致敏和激发两步。

　　2.2.1 致敏用1 ml 0.9% NaCl配制的OVA混悬液(100 mg OVA+100 mg氢氧化铝+百日咳杆菌6×109个)开始隔天腹腔注射，直至第14 天。

　　2.2.2 激发从第15天起将除正常对照组外动物放入密闭的雾化箱内，雾化吸入生理盐水配制的3%OVA(流量为3 ml/min)，1次/d，每次20 min，直至第28天。

　　2.3 给药方法各组均从激发那天开始给药，1次/d。

　　2.3.1 正常对照组和模型组从造模第15天起开始经口灌生理盐水1ml。

　　2.3.2 哮喘宁合百令胶囊组从第15天起开始经口灌药，哮喘宁4.5ml·kg-1·d-1 [2](相当于人50 ml·d-1)，百令胶囊0.54g·kg-1·d-1(相当于人30粒·d-1)。

　　2.3.3 哮喘宁组从第15天起开始经口灌药，4.5ml·kg-1·d-1(相当于人50 ml·d-1)。

　　2.3.4 百令胶囊组从第15天起开始经口灌药，0.54 g·kg-1·d-1(相当于人30粒·d-1)。

　　2.3.5 地塞米松组从第15天起开始经口灌药，1 mg·kg-1·d-1(相当于人12 mg·d-1)。

　　2.4 血清取材方法各组大鼠经12%乌拉坦[1 ml·(100 g)体质量]腹腔注射麻醉，待大鼠进入麻醉状态后，打开腹腔，充分暴露腹腔血管，分离腹主动脉取血，混匀后1 500 r·min-1离心10 min，小心吸取上部血清，保存于-80℃冰箱中。

　　2.5 测定方法用双抗体夹心ABC-ELISA法，IL-4，IL-5，IFN-γ,TNF-α含量测定分别用大鼠IL-4，IL-5，IFN-γ，TNF-α定量试剂盒检测。检测程序按照试剂盒说明书进行。

　　2.6 数据分析各组数据均值以±s表示，用t检验进行统计分析。