二仙汤治疗男性更年期综合征临床疗效与细胞色素P450 3A4基因多态性关系的研究
4.Marker;1，2，3，4，5，6，7，8，9为扩增产物，长度为354 bp
图1 CYP3A4 rs2242480扩增产物图片
2.2 基因型及等位基因分布所提取的DNA经过Ultrospec 4000UV/visible Spectrophotometer测定，其纯度均在1.7～1.9之间，可用于PCR扩增反应。χ2检验统计学分析，治疗组与对照组的基因型及等位基因分布差异无显著性(P>0.05)。见表2及 图4。两组间的人口学分布特征无差异。5，7.Marker;1，2.C/T基因型;3，4，6.C/C基因型
图2 CYP3A4 rs2242480扩增后RsaI酶切图
表1 二仙汤治疗前后总分值变化 图3 二仙汤治疗前后总分值变化
表2 CYP3A4 rs2242480的基因型及等位基因分布 图4 CYP3A4 rs2242480基因型分布
2.3 不同治疗效果CYP3A4 rs2242480基因型及等位基因分布治疗组依据疗效分为两组,有效组和无效组。有效组49例受试者中有30例的基因型为C/T(61.22%);而无效组27例受试者中有17例的基因型为C/C(62.96%)。见表3及图5表3 不同治疗效果CYP3A4 rs2242480的基因型及等位基因分布
2.4 有效组CYP3A4 rs2242480基因型与阴阳两虚相关因素分析治疗有效者CYP3A4 rs2242480基因型与肾阴阳两虚证相关因素分析参考《中药新药临床研究指导原则》，不同基因型治疗有效者治疗前、治疗后的肾阴阳两虚证主证、次症评分无明显差异。见表4及图6。
2.5 有效组CYP3A4 rs2242480组间症状评分及等位基因分布治疗有效者CYP3A4rs2242480组间症状评分根据伊斯坦布尔Bosphorus大学心理系将症状量化的方法，二仙汤在治疗男性更年期综合征治疗前和治疗后，对体能、心血管、精神心理症状、性功能症状评分无明显差异。见表5及图7
图5 不同疗效CYP3A4 rs2242480基因型分布
2.6 治疗前后LH，FSH，F-T，ALT，Creat的变化治疗组服用二仙汤后黄体生成激素以及肌酐血浆浓度降低(P<0.05)，促卵泡激素、游离睾酮以及谷丙转氨酶无明显差异(P>0.05)。服用二仙汤后血浆黄体生成激素降低，而促卵泡激素无明显差异，对肝肾功能无损害。见表6及图8。表4 49例治疗有效组CYP3A4 rs2242480的基因型与肾阴阳两虚相关因素分析 图6 49例治疗有效组CYP3A4 rs2242480的基因型与肾阴阳两虚相关因
表5 49例治疗有效组CYP3A4 rs2242480组间症状评分及等位基因分布
3 讨论
存在于肝细胞微粒体中细胞色素P450 ( cytochrome P450，CYP ) 是一个基因超家族，与药物代谢有关，CYP450有许多亚族，其中最主要是CYP450 3 A亚族( CYP 3 A) ，占肝细胞CYP 4 5 0的3 0%～6 0% 。人类CYP3 A有4个亚型，但只有编码CYP 3 A4 、CYP 3 A5和CYP3A7的酶具有活性，这些酶可以参与结构不同的外源性物质的代谢[4]，现已发现CYP3A4参与了大约38个类别共150多种药物(约占全部药物50%)的代谢。
图7 49例治疗有效组CYP3A4 rs2242480组间症状评分及等位基因分布 中药是一个复杂的巨系统，无论是复方还是单方，其药效都是其中多种化学成分相互作用所产生的综合效果。这些化学成分相互协同或相互拮抗，从而产生中药的药理作用[5]。二仙汤的主要组成中的仙灵脾有类似雄激素样的作用，仙灵脾水煎剂有可促进精液分泌，提高性功能;动物实验证实，小鼠腹腔注射仙灵脾提取物，可增加前列腺、精囊、提肛肌的重量，其效果与雄激素相当[6]; 仙灵脾能提高阴茎海绵体平滑肌cGMP浓度，对离体阴茎海绵体比较强的松弛作用[7]，仙灵脾主要成分为淫羊藿苷，属于黄酮类;黄酮类中药可以抑制或者诱导代谢酶P450，从而影响多种药物在体内、外的代谢[8]。CYP3A4参与大量内源性和外源性化合物的代谢，可被类固醇诱导，可代谢的内源性化合物包括孕酮、皮质醇、睾丸酮和雄稀二酮等激素和外源性化合物包括当归[9]、黄柏[10]等二仙汤组成成分。所以，我们选择CYP3A4基因为候选基因，研究二仙汤在治疗男性更年期综合征疗效的个体差异与细胞色素P4503A24(CYP3A4)酶基因单核苷酸多态性的相关性。
表6 治疗前后LH，FSH，F-T，ALT，Creat的变化 图8 治疗前后LH，FSH，F-T，ALT，Creat的变化
二仙汤在治疗男性更年期综合征中，对体能状态，心血管状态，精神心理状态及性功能均明显改善，我们将二仙汤治疗肾阴阳两虚男性更年期综合征主症、次症评分比较，治疗前比治疗后有明显变化， 参照国家《中药新药临床研究指导原则》，比较二仙汤治疗男性更年期综合征疗效总分值，二仙汤治疗无效35.52%，有效64.47%，。
经过临床观察统计，按照《中药新药临床研究指导原则》计算中药新药有效标准，计算出有效组49例，其中CYP3A4 rs2242480 C/T型有效30例，占总有效组61.22%;无效组27例，CYP3A4 rs2242480 C/C型占17例，达到62.96%。表明二仙汤治疗男性更年期综合征个体含CYP3A4 rs2242480基因型为C/T有效率较高，个体含CYP3A4 rs2242480基因型为C/C无效率较高。
药物的生物转化是由多种药酶催化进行的，而药酶遗传多态性是引起临床药动学特征变异、药物不良反应和治疗失败的主要原因[11]。因此了解药酶的基因多态性是解决临床药物发挥正常药效和减少不良反应的基础，通过研究指导合理用药，来提高药物作用的有效性、安全性和经济性。通过研究药物代谢酶基因多态性与药物反应之间的内在联系，将对个体药物反应做出预测。在临床合理用药、个体化医疗及新药开发等方面带给人们的将是一次极大的机遇与挑战。基因多态性与个体对药物敏感性或耐受性的相关性，可以阐明遗传因素对药物效用的影响，从而对个体化用药和药物开发提供指导和依据。
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