青蒿琥酯对肝癌HEPG-2细胞Caspase-3和P53蛋白的影响实验研究
3.3 DNA ladder的观察 细胞凋亡最主要的生化标志是内源性钙一镁离子依赖性核酸内切酶被激活，选择性降解染色体核小体间DNA，从而在琼脂糖凝胶电泳上可能呈现规则的、间隔180～200 bp的“DNA梯子”样条带。由图1可见，Art处理HEPG-2细胞48h后，进行琼脂糖凝胶电泳，随着药物浓度的加大，“DNA梯子”样条带逐渐清晰，呈一定的剂量依赖性。
表1 Art作用后caspase-3的浓度 图1 Art处理后的电泳图
3.4 免疫组化结果细胞染色评分参考薛宏伟等的方法[3]。本实验对HEPG-2肝癌细胞株的凋亡相关基因产物p53、bcl-2、bax蛋白进行了研究，结果发现，用青蒿琥酯(100 μg/ml)处理48h后的肝癌细胞，p53蛋白表达低于细胞对照组， bax表达高于对照组，差异有统计学意义。见图2及表2。
4 讨论
细胞凋亡是由基因编码调控的细胞主动自杀过程，肿瘤细胞凋亡相关蛋白和基因的研究是近年来肿瘤研究领域的热点。Caspase家族在介导细胞凋亡途径的过程中起着非常重要的作用，而Caspase-3是细胞凋亡最为关键的执行分子，因此，研究Caspase-3的活性，具有重要的意义[4]。
本实验中各浓度青蒿琥酯作用后肿瘤细胞中caspase-3活性明显高于对照组(P<0.01)，说明药物作用后HEPG-2细胞中Caspase-3活性增强，据此可初步判断青蒿琥酯有促进HEPG-2凋亡的作用，其机制之一可能是通过激活Caspase-3的活性。同时本实验从肿瘤细胞DNA变化方面也证实细胞发生凋亡，青蒿琥酯作用细胞48 h后，凝胶电泳显示，随着药物浓度的加大，“DNA梯子”条带逐渐清晰。P53属于抑癌基因，正常的P53基因又叫野生型P53基因，对细胞分裂及增殖起负调空作用，基因突变导致P53基因功能失活。免疫组化结果显示，用青蒿琥酯(100 μg/ml)处理48 h后的肝癌细胞，P53蛋白表达低于细胞对照组(P<0.05)，bax表达高于对照组(P<0.05)，说明Art可能通过调节突变型P53基因，影响bcl/bax基因的表达等途径诱导肿瘤细胞凋亡。
图2 免疫组化图片(20×)表2 免疫组化评分结果(+s)
【参考文献】
[1] THOMAS EFFERTH, AXEL SAUERBREY.Molecular Modes of Action of Artesunate in Tumor Cell Lines [J]. Mol Pharmacol，2003，64:382.
[2] 李 静，杨 斌，陈永顺，等.青蒿琥酯对人肝癌HEPG-2细胞增殖作用的研究[J].时珍国医国药，2008,19(4)：823.
[3] 薛宏伟，潘祥麟,杨尚军，等.冬凌草乙素诱导GBC-SD细胞的凋亡及对BCl-2，P53， FAS/APO-1，Cmyc表达的影响[J]. 中国药理学通报，2003， 19(11): 1247.
[4] 詹其敏.分子肿瘤学[M]. 北京：人民军医出版社， 2005：403.