脑得生软胶囊高效毛细管电泳指纹图谱研究

           作者：王光忠，刘艳菊，张明，肖锦，刘焱文

【摘要】  目的采用高效毛细管电泳(HPCE)法测定脑得生软胶囊的指纹图谱。方法运行缓冲液：30 mmol/L硼砂-50 mmol/L磷酸氢二钠，pH9.98;操作电压15 kV，检测波长260 nm，柱温25℃，采用压力进样，进样时间8 s。分析时间25 min。结果指纹图谱中标示了16个共有峰，其峰面积之和大于总峰面积的90%，方法精密度、稳定性、重复性均符合指纹图谱有关规定。采用夹角余弦法，计算10批脑得生软胶囊指纹图谱相似度结果均在0.93～1.00之间，但不同厂家生产的脑得生片有较大差别。结论该方法为脑得生制剂的质量控制提供了依据。

【关键词】  脑得生软胶囊; 指纹图谱; 高效毛细管电泳

　　Abstract：ObjectiveTo develop the fingerprint of Naodesheng soft capsules by HPCE.MethodsThe background electrolyte consisted of 30 mmol/L sodium borate and 50 mmol/L sodium hydrogen phosphate and its pH was 9.98 ,applied voltage was 15kV,operating temperature was 25℃, the detection wavelength was at 260 nm and the analysis time was 25min.Results16 peaks were indicated.The peak area of these components was over 90% of total area in the fingerprint.RSD of precision and reproducibility was in the range of 5%. The results of similarity evaluated by cosine were 0.93～1.00 from 10 batches,but that of 3 batches of Naodesheng tablets from the other manufacturers were different .ConclusionThe method may provide reliable foundation of quality control of Naodesheng preparation.

　　Key words：Naodesheng soft capsules ; Fingerprint; HPCE

　　脑得生软胶囊是根据脑得生丸(片)经工艺和剂型改革而来。脑得生丸(片)收载于《中国药典》2005年版Ⅰ部，由三七、川芎、红花、葛根、山楂等5味中药组成，具有活血化瘀、通经活络的功效。用于瘀血阻络所致的眩晕、中风，症见肢体不用、言语不利及头晕目眩;脑动脉硬化、缺血性脑中风及脑出血后遗症见上述证候者[1]。临床应用广泛,疗效确切。但其制备方法为传统生产工艺，质量可控性差、药物稳定性难以控制，因而对临床疗效和患者服用有较大的影响，不能适应现代临床用药要求。为此，本实验室对其活性部位进行了提取纯化[2]，在此基础上研制成脑得生软胶囊。本论文采用高效毛细管电泳(HPCE)法对脑得生软胶囊进行了指纹图谱研究，并对不同厂家生产的脑得生片进行了指纹图谱分析比较，为脑得生制剂的质量控制提供科学依据。

　　1 仪器与试药

　　Beckman P/A system5000型毛细管电泳仪(美国Beckman公司);融熔石英毛细管柱75 μm×57 cm(河北永年瑞沣色谱器件有限公司);十万分之一天平(Sartorius BP211D)。 脑得生软胶囊(实验室自制，批号070801，070901，071001，071213，071214，071215，080815，080817，080824，080826);脑得生片，市售;葛根素购自中国药品生物制品检定，批号110752-200209;硼砂、磷酸氢二钠、氯化钠、氢氧化钠为分析纯，乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸水。

　　2 方法与结果

　　2.1 电泳条件运行缓冲液：30 mmol/L硼砂-50 mmol/L磷酸氢二钠，pH 9.98;操作电压15 kV，极性由正到负，检测波长260 nm，柱温25℃，采用压力进样，进样时间8 s。毛细管冲洗方法：开机后用0.1 mol/L氢氧化钠溶液冲洗2 min，运行缓冲液3 min，每次测定之间运行缓冲液冲洗2 min。

　　2.2 对照品溶液的制备精密称定葛根素和芦丁对照品适量，用含0.5%氯化钠的60%乙腈溶液制成每毫升含50 μg的对照品溶液。

　　2.3 供试品溶液的制备取脑得生软胶囊6粒(1 d剂量)，除去胶皮，取内容物置具塞锥形瓶中，加入0.5%氯化钠的60%乙腈溶液100 ml，超声处理30 min。放冷后摇匀，再以0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。

　　2.4 测定方法 取供试品溶液，按“2.1”项下条件进行分析，考察60 min内供试品溶液的色谱分离情况，记录25 min色谱图。结果见图1图1 样品HPCE图谱

　　2.5 方法学考察

　　2.5.1 精密度与稳定性实验称取同一批号的样品，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定5次(0，3，6，9，12 h)，记录相对保留时间和相对峰面积的比值，结果其共有峰相对保留时间的RSD均小于2%，共有峰的峰面积比值的RSD均不超过5%，符合指纹图谱的技术要求。

　　2.5.2 重复性实验取脑得生软胶囊内容物5份，分别按供试品溶液的制备方法制备供试溶液，进样分析，其共有峰相对保留时间的RSD均小于2%，共有峰的峰面积比值的RSD均不超过5%，表明该方法的重复性良好。