运动配合中药及艾灸对慢性疲劳综合症大鼠行为及外周血淋巴细胞凋亡的影响
3.1 运动配合中药及艾灸足三里对CFS大鼠模型行为的影响
3.1.1 动配合中药及艾灸足三里运对CFS大鼠模型旷场行为的影响运动配合中药及艾灸足三里对CFS大鼠模型旷场行为的影响见表1。表1 旷场实验数据(略)
旷场行为探洞次数在实验中期参与造模3组相对于CG有显著差异（P＜0.05），但最后一次这种差异消失。在总路程、活动时间、平均速度3项指标，CFSG显著（P＜0.01）低于CG；MG和ETCMG显著（P＜0.01）高于CFSG。此外，总路程ETCMG显著（P＜0.05）高于MG；平均速度ETCMG高度显著（P＜0.01）高于MG。
3.1.2 运动配合中药及艾灸足三里对CFS大鼠模型悬尾行为的影响悬尾实验结果如表2所示。表2 悬尾实验活动时间(略)
从表2中可以看出CFSG显著（P＜0.01）低于CG；实验中期ETCMG高度显著（P＜0.01）高于CFSG，显著（P＜0.05）高于MG。
3.1.3 运动配合中药及艾灸足三里对CFS大鼠模型记忆行为的影响
Morris水迷宫学习实验结果：Morris水迷宫学习实验第4天的学习实验，共4个象限。结果见表3。表3 Morris水迷宫学习实验潜伏期结果(略)
第1象限的学习潜伏期，CFSG显著（P＜0.05）长于CG，MG和ETCMG显著（P＜0.05）短于CFSG。第4象限，参与造模的3组均长于CG（P＜0.05）。
Morris水迷宫探索及可视平台实验结果：Morris水迷宫探索实验只进行1个象限。结果见表4。表4 Morris水迷宫探索及可视平台实验结果(略)
可视平台试验结果各组间无差异（P＞0.05），探索穿越次数CFSG和MG多于CG（P＜0.05），参与造模的3组探索Ⅱ象限时间和大鼠在探索Ⅱ象限的百分率均多于CG（P＜0.05）。
3.2 运动配合中药及艾灸足三里对CFS大鼠模型外周血淋巴细胞细胞凋亡的影响实验结果运动配合中药及艾灸足三里对CFS大鼠模型外周血淋巴细胞细胞凋亡的影响实验结果见表5。表5 各组大鼠淋巴细胞凋亡指数的比较(略)
CFSG和MG早期凋亡高度显著（P＜0.01）多于CG；CFSG和MG凋亡指数都显著（P＜0.01）多于CG；ETCMG凋亡指数高度显著（P＜0.01）低于CFSG；晚期凋亡CFSG显著（P＜0.05）多于CG，ETCMG显著（P＜0.05）低于CFSG；无论早期凋亡、晚期凋亡还是凋亡，ETCMG与CG都无差异。
4 讨论
4.1 CFS干预方法的选择世界各国学者对于CFS的治疗手段也各有不同，有的用日本草药［5］，有的用抗抑郁药物［6］给CFS大鼠模型或人服用来观察疗效。中药和针灸对CFS进行治疗研究的报告近来年也逐渐增多。
已有研究表明慢性疲劳可引起肝细胞物质代谢功能持续紊乱,最终导致肝功能损伤［7］。中医学认为CFS属于中医虚劳范畴，兼有郁证、惊悸等疾病的某些症状，是一种多脏器、多系统功能失调的疾病，其病因可归结为与劳逸、情志、饮食、起居等有关，其根本病机为气机失调、气血不足、脏腑功能衰退，尤其是肝脾肾不足在慢性疲劳综合征的发生、发展中起着重要作用［8］。在《素问》中有：“肝受血而能视，足受血而能步，掌受血而能摄。肝气虚，筋不能动。”及“脾病者身重”、“脾气虚则四肢不用”等记载。因此本试验所用中药片剂是由疏肝健脾的中药：柴胡、白芍、佛手、茯苓、黄芩、川芎、小麦、大枣、甘草等组成，在临床中我们也用来调理考试应激状态［9］或治疗慢性疲劳。柴胡、佛手疏肝解郁，茯苓、白芍、黄芩、甘草健脾益气等为主药，辅以小麦、大枣养心，川芎活血等，以达解郁除烦，健脾益气养心，从而改善由于慢性疲劳引起的焦虑、气虚无力等诸症。
休闲运动本身也是对CFS的放松疗法，运动可以促进血液循环，加速新陈代谢，所以我们对CFS模型大鼠采用自由跑笼运动结合中药的方法，来观察对CFS大鼠模型的影响。我们控制运动量每天200圈，而非运动时间。因为如果控制时间，大鼠可能很长时间不动，而达不到运动效果。大鼠运动强度完全自由，不强迫。
中医疗法提出整体观念，辨证施治，针对患者全面调整，提高疗效。足三里是足阳明胃经合穴，具有理脾胃、调营血、补虚损的作用，为强壮要穴。《太平圣惠方》言:“亦主五劳羸瘦,七伤虚乏”,有健脾和胃、补气养血的作用。大鼠模型症状表现为嗜睡，疲倦，行为活动减少，多属中医虚劳，《扁鹊心书》认为虚劳类疾病“……必用火灸，方可回生。” 艾灸亦用补法,如《针灸大成》所说:“以火补者,毋吹其火,须自灭,即按其穴”。已有研究表明艾灸对外周血淋巴细胞凋亡有一定程度抑制［10］，其选取多穴位，本实验选取单一足三里穴位，研究其效果。
4.2 运动配合中药及艾灸对CFS大鼠模型行为的影响
4.2.1 对大鼠悬尾实验的影响大鼠在悬尾时，由于体位不正常，会进行激烈的挣扎、抖动和打转。悬尾时活动时间越长，则说明体力和情绪越好。本实验通过在悬尾5 min过程中的活动时间的长短说明慢性疲劳模型大鼠躯体和心理疲劳状态。本实验结果显示,CFSG大鼠悬尾的活动时间减少,体力明显下降,“躯体疲劳”状态表现为明显抑郁样，出现典型的疲劳状态。CFSG大鼠的鼠尾悬挂静止时间较CG明显（P＜0.01）延长。而ETCMG在实验中期测试时有明显改善，相对于CG有高度显著差异，但随造模的继续进行，疲劳的积累到造模结束时，ETCMG与CG无差异。运动配合中药方法CFS大鼠模型悬尾试验行为有良好的调理作用，可以增加大鼠悬尾的活动时间,但艾灸对悬尾实验活动时间的影响不明显。
4.2.2 对大鼠旷场实验的影响旷场实验是反映大鼠在新环境中的探究行为及情绪的方法,可用来测试动物中枢神经系统的“兴奋”或“抑郁”状态［11］。抑郁症状的表现为探洞次数的减少、总路程减少、活动时间缩短和平均速度降低。除探洞次数指标外，CFSG旷场行为有显著降低(P＜0.01），有“抑郁”倾向，处于疲劳状态，中药配合运动方法和艾灸足三里方法对降低的旷场行为有显著改善(P＜0.01），ETCMG大鼠有些指标甚至超过CG的行为水平。艾灸及运动配合中药方法有一定的抗“心理疲劳”、抗应激疲劳的作用。
4.2.3 对大鼠记忆行为-水迷宫实验的影响Morris水迷宫实验是反映大鼠学习和空间记忆能力的常用方法，分为学习期和测试期。先学习，后测试。测试又分为可视平台和探索试验。学习期的潜伏期越短，表明大鼠的学习和空间记忆越好，认知过程越快。CFSG第1、第4象限学习潜伏期长于CG，所以CFS造模大鼠学习行为有降低的影响。
可视平台实验组间无差异，排除了本实验大鼠记忆行为结果不是由于视力和体力原因造成的。在探索试验中，大鼠对于平台所在象限经过的时间总和及在1 min的探索过程中，在目标象限的百分数可以反映大鼠对平台的记忆程度。目标展台的穿越次数越多，表明大鼠对站台位置的记忆越好，在目标象限的时间越长所占百分数越大说明大鼠记忆越好。目标站台区的穿越次数CFSG、ETCMG显著多于CG，在目标象限的时间以及时间百分率CFSG、MG、ETCMG也显著高于CG。分析其原因可能大鼠在每天造模刺激中经过训练，它们对不良环境存在一定的适应，比CG更快达到身体和大脑对外界刺激引起的紧张程度水平，经常被造模刺激使大鼠紧张程度高，注意力会更集中，记忆效果会好一些，而CG没有造模刺激，紧张程度低，记忆效果差。另结果显示运动配合中药及艾灸方法对记忆没有影响，表明两种方法对大鼠学习记忆没有帮助。
4.3 对CFS大鼠模型外周血淋巴细胞细胞凋亡的影响本研究使用流式细胞仪，将Annexin V与PI匹配使用，把处于不同凋亡时期的细胞区分开来。由于CFS的造模，外周血淋巴细胞凋亡细胞百分率提高，原来凋亡和新生成淋巴细胞的动态平衡遭到CFS造模过程的破坏，凋亡细胞的增多，可能是机体由于体力和精神疲劳，造成循环血中淋巴细胞寿命缩短，细胞由于应激而启动凋亡程序基因，加速了外周血淋巴细胞的凋亡，早期、晚期凋亡指数均显著增加。慢性疲劳加速外周血淋巴细胞凋亡，其对机体免疫功能的影响有待于更深入的研究。运动配合中药疗法对增多的细胞凋亡指数有明显降低的影响，艾灸足三里对外周血淋巴细胞凋亡指数无影响，说明运动配合中药疗法对慢性疲劳免疫系统有一定的调理作用，其机制也有待进一步研究。
本实验结果提示：慢性疲劳动物模型大鼠在动物行为上表现出明显的疲劳样，在外周血淋巴细胞凋亡上表现明显差异，表明CFS造模影响动物行为和外周血淋巴细胞凋亡；艾灸对动物行为有影响，有效缓解造模而形成的抑郁旷场行为，但对悬尾行为和外周血淋巴细胞凋亡未见影响；运动配合中药干预方法能明显降低由于造模而升高的外周血白细胞凋亡指数，缓解大鼠在旷场、悬尾试验中焦虑参数，但未见运动配合中药干预方法对记忆行为的影响。
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［11］徐叔云，卞如廉，陈 修.药理实验