秦艽提取物抗病毒的药效学实验研究

                    作者：李永平，李向阳，王树林，袁冬平，李福安

【摘要】  　　目的 研究中药秦艽在体内对流感病毒的防治作用。方法复制乙型流感病毒感染小鼠肺部感染性疾病动物模型，以利巴韦林为阳性对照,观察秦艽对乙型流感病毒感染小鼠的保护作用。结果秦艽提取物可明显延长乙型流感病毒感染小鼠存活天数和存活率；对乙型流感病毒感染小鼠肺指数、肺组织形态学都有保护作用，与模型组比较具有显著性差异（P<0.05）。结论 秦艽具有较好的抗乙型流感病毒感染的作用。

【关键词】  秦艽； 抗病毒； 乙型流感病毒； 肺炎； 药效学

　　Abstract：ObjectiveTo study the protective effect of Gentiana macrophylla Pall against flu virus in mice．
MethodsThe pneumonia mice were infected with influenza B virus. The protective effect of Gentiana macrophylla Pall on the mice infected influenze B virus was observed using ribavirin as the positive reference drug.ResultsThe Gentiana macrophylla Pall extract obviously prolonged survival days and survival rate of the mice infected influenze B virus, and protected lung index and lung morphology of the mice infected influenze B virus.There was significant difference between the two groups (P＜0.05). ConclusionGentiana macrophylla Pall has the effect against infected influenze B virus.

　　Key words：Gentiana macrophylla Pall;   Anti-viral;   Influenze B virus ;   Pneumonia;   Pharmacodynamics
  
　　秦艽Gentiana macrophylla Pall是龙胆科龙胆属多年生草本植物，是我国历代常用的中药材，具有很高的药用价值，中医以根入药，藏医以全草入药，有祛风湿、止痹痛、退虚热、清湿热等功效。秦艽中含有龙胆苦苷、当药苦苷、龙胆次碱、挥发油及多糖等成分。现代药理研究发现秦艽具有抗炎、镇痛、调节免疫、保护肝损伤、抗菌、降血压、利尿消肿等作用［1～3］，被广泛用于心脑血管疾病，呼吸道疾病，肝胆疾病，风湿、类风湿性关节炎等疾病的治疗［4，5］，秦艽及其复方临床常用于病毒性疾病的治疗［6～8］，但没有相关的实验研究报道。前期的研究发现秦艽具有抗甲型流感病毒的作用［9］，本文通过动物实验研究秦艽抗乙型流感病毒的药效作用。

　　1   材料与仪器

　　1.1   病毒株

　　乙型流感病毒B/京防98-76，由中国预防医学科学院病毒所提供。

　　1.2   动物ICR小鼠，体质量12～15 g，雌雄各半，由南京青龙山动物繁殖厂提供，合格批号：（苏）SCXK2002-0018。给药前后，实验小鼠分笼饲养全价颗粒饲料,由江苏协同医药生物技术有限公司提供，合格证号：苏A饲生字2002(009),批号：051218。自由饮水，室温（20±2）℃，湿度55%～65%。；鸡胚(9日龄)，南京中牧股份药械厂提供。

　　1.3   仪器FA1004电子天平（上海天平厂）；超净工作台（苏州净化设备厂）；恒温孵箱（上海分析仪器厂）；CO2培养箱（德国贺利氏公司）；PYX-DHS隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）；YXQ-280 电热式压力蒸汽消毒器（上海医疗器械厂）；SB2000 超声波清洗器（上海中能超声有限公司）。

　　1.4   试剂乙醚（南京试剂厂  批号050113）；苦味酸（上海化学试剂公司供应站，批号000122）；鸡红细胞（新鲜公鸡血，用生理盐水洗涤3次备用）。

　　1.5   药品 

　　秦艽采自青海省果洛州青海大学医学院秦艽种植基地，药材经青海大学医学院中药教研室魏全嘉教授鉴定为麻花秦艽G.straminea.Maxim。所有秦艽水提物和醇提物均在青海大学医学院中藏药研究中心自提，最后配制成浓度为1 g生药/ml的溶液，4℃冰箱保存。利巴韦林（四川美大康药业股份有限公司  批号050723）；氯化钠（江苏太仓化工厂，批号040416）。

　　2   方法

　　2.1   血凝试验取24孔微孔板1个，除第1孔加入生理盐水0.9 ml外, 其余每孔加入生理盐水0.5 ml。将增毒3次的病毒尿囊液0.1ml加入第1孔内混匀后加入第2孔0.5 ml，稀释至第8孔，第9孔不加病毒尿囊液，作空白对照。每孔加入0.5%鸡红细胞0.25 ml,轻轻摇匀后于室温放置2 h观察结果，记录结果2，5，7，10，12，16，17号血凝试验(HA)为640以上，可用于乙型流感病毒感染小鼠半数致死量(LD50)滴定。

　　2.2   乙型流感病毒感染小鼠半数致死量(LD50)滴定取ICR小鼠56只，体质量12～15 g，雌雄各半，随机分7组，每组8只，取增毒3次的病毒尿囊液，以10倍稀释，每组滴1个病毒浓度，各组小鼠在乙醚浅麻醉下以血凝滴度为640病毒尿囊液30 μl滴鼻感染小鼠，观察14 d内死亡数，按Reed- Muench法计算，乙型流感病毒感染小鼠半数致死量(LD50)滴定结果为LD50为10-1.60。

　　2.3   秦艽对乙型流感病毒感染小鼠的保护作用取ICR小鼠100只，体质量12～15 g，雌雄各半，随机分5组，每组20只：①正常对照组：等量NS；②模型对照组：等量NS；③利巴韦林组：0.1 g·kg-1；④秦艽水提取物组（简称秦艽水提组）：10 ml·kg-1；⑤秦艽醇提物组（简称秦艽醇提组）：10 ml·kg-1； 以上各组小鼠均灌胃给药，连续给药5 d，于末次给药当日各组小鼠(除正常对照组外)在乙醚浅麻醉下以血凝滴度640以上的尿囊液给小鼠滴鼻感染，每鼠50 μl，观察动物感染后发病及死亡情况,记录14 d内死亡数。

　　2.4   秦艽对乙型流感病毒感染小鼠肺指数的影响取ICR小鼠50只，体质量12～15 g，雌雄各半。随机分5组，每组10只，分组方法同“2.3”项。各组小鼠均灌胃给药，连续给药5 d，于末次给药当天各组小鼠(除正常对照组外)，在乙醚浅麻醉下以病毒尿囊液滴鼻感染小鼠，每鼠30 μl。实验前禁食不禁水，实验当日各组小鼠称重，脱颈处死，解剖，观察肺部病变，取全肺称重，计算各鼠肺指数值，肺指数抑制率，比较各组间差异，并取鼠肺用10%甲醛固定，作病理组织学检查。

　　2.5   统计方法

　　数据采用SPSS 11.0统计软件处理，组间进行LSD-t检验和χ 2检验。