枸杞多糖对人食管癌细胞增殖的抑制作用及与Rb蛋白表达的关系
2.3 LBP 对TE13 细胞凋亡的影响TE13 细胞的凋亡率随LBP 作用时间的延长(24，48，72 h) 和LBP浓度的增加(0，200，400，800 μg/ml),TE13 细胞的凋亡率明显升高（P<0.01）见图1;不同浓度LBP处理48 h 后,亚二倍体凋亡峰逐渐增高。
2.4 LBP 对TE13 去磷酸化Rb 蛋白表达的影响Rb 蛋白在未经LBP 处理的细胞TE13 中仅见少数细胞呈现弱表达,经LBP处理后,Rb 蛋白表达阳性细胞数增加。对LBP 作用组TE13 细胞的凋亡率与去磷酸化Rb 蛋白表达量进行线性相关分析, 呈正相关(r= 0.900,P<0.01) 。结果见表2。表2 不同浓度LBP作用TE13细胞的凋亡率及表达去磷酸化Rb蛋白的阳性细胞率（略）
3 讨论
本实验中LBP 对人食管癌细胞TE13 增殖影响的研究结果显示,微量的LPB(100 μg/ml) 即对TE13 细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈浓度和时间依赖性。LBP 诱导细胞发生凋亡,随着LBP 浓度的增加, TE13 细胞亚G1峰逐渐增高, 表明LBP 能够诱导肿瘤细胞快速凋亡。
Rb 蛋白是细胞周期和细胞分化中重要的转录调节因子,处于细胞生长和分化的中心环节,在控制细胞进入细胞分裂周期及脱离细胞周期进入分化状态中起关键作用［4,5］,目前认为其抑癌机制主要是通过与一类转录因子EIF 的结合或解离,控制着细胞由G1进入S 期。Rb 基因的抗癌性主要与其蛋白产物Rb蛋白有关,已有研究表明高表达的去磷酸化的Rb 蛋白能够诱导肿瘤细胞发生凋亡［6］。Rb 蛋白在细胞核中表达,并以高磷酸化和低磷酸化的形式存在,低磷酸化或者去磷酸化Rb蛋白为其活性形式,可与转录因子EIF 及其它肿瘤蛋白结合从而使其丧失转录活性,使肿瘤细胞阻滞在G1 期,抑制其增殖。所以细胞中去磷酸化Rb 表达增加,将阻止肿瘤细胞的大量增殖促进其凋亡。近年的研究发现, Vp-16、5-Fu 抑制结肠癌细胞(HIC/ S) 增殖和诱导凋亡与细胞内Rb 蛋白表达增高相关［7,8］。Zhao等［9］的报道也表明,癌细胞凋亡过程中去磷酸化形式的Rb 蛋白明显高表达本实验以人食管癌细胞TE13为研究对象, 探讨去磷酸化Rb 蛋白表达状况与枸杞多糖(LBP)诱导肿瘤细胞TE13 凋亡和抑制其增殖之间的关系。研究结果显示LBP 对人食管癌TE13 细胞的生长增殖具有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,同时使去磷酸化Rb 蛋白的表达增加,且去磷酸化Rb 蛋白的表达量与LBP 诱导TE13 细胞凋亡率呈正相关。据此推测,增高细胞内去磷酸化Rb 蛋白表达量可能是LBP发挥抑瘤作用的机制之一。本实验研究结果为中药枸杞多糖的开发利用提供了实验依据。
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