红芪多糖的纯化及初步结构鉴定

来源:岁月联盟 作者: 时间:2015-05-19

  3  结果

  3.1  脱蛋白方法的选择以蛋白脱除率和多糖损失率为指标,比较 Sevag法、三氯乙酸法和三氯乙酸-正丁醇法的脱蛋白效果(见图1)。Sevag法的多糖损失率最低,但脱蛋白率也最低;三氯乙酸-正丁醇法的脱蛋白率最高,多糖损失率最低;三氯乙酸法的脱蛋白率达 30%以上,但多糖损失最高。综合各方面的因素,本实验选取三氯乙酸-正丁醇法脱除红芪多糖中的蛋白质。

  3.2  红芪多糖分离纯化红芪多糖经Sephadex G-25柱层析纯化分离的洗脱曲线(见图2)。仅出现 1个洗脱峰, 收集主峰, 透析, 浓缩,冷冻干燥, 得到 HPS-2。

  3.3   纯度鉴定HPS-2的紫外扫描在 260~280nm处吸收峰消失,茚三酮反应呈阴性,说明样品中的蛋白质基本除尽,也无核酸存在;碘-碘化钾反应呈阴性,表明样品为非淀粉多糖;经 HPLC凝胶色谱后为单一对称峰。表明其为均一组分;苯酚-硫酸法测定 HPS-2的糖含量为 98.06%。

  3.4    红芪多糖的结构分析

  3.4.1   气相色谱分析

  气相色谱分析(见图 3)。比较标准品和样品的保留时间,可见多糖 HPS- 2由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖5种单糖组成。其摩尔组成比例为 0.3∶0.2∶2.7∶16.1∶2.0。

  3.4.2    薄层色谱分析HPS-2 经薄层色谱(见图 4)。检出半乳糖(Rf对=Rf样=0.40)、葡萄糖(Rf对=Rf样=0.30)、阿拉伯糖(Rf对=0.20,Rf样=0.19)、木糖(Rf对=Rf样=0.62)和鼠李糖(Rf对=Rf样=0.77),其中木糖和鼠李糖含量较低,斑点不明显。这与气相色谱结果一致。

  3.4.3  红外分析从IR谱图由图 5可见,HPS-2在 3 600~3 200 cm-1、3 000~2 800 cm-1和 1 400~1 200 cm-1处均具有多糖的特征吸收峰。1 154、1 080、1 024 cm-1处为 β-吡喃糖基的振动峰[7];898 cm-1为 β-糖苷键的吸收峰,820 cm-1处为 α-吡喃糖的吸收峰,说明多糖 HPS-2中存在 α和 β两种类型的苷键,并以吡喃型糖为主。

  4  结论
   
  本实验比较了3种脱蛋白方法,三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白效果最好,脱除率达 37.2%,多糖损失率少。利用葡聚糖凝胶 Sephadex G-25柱层析分离纯化红芪多糖得 HPS-2,经 HPLC及紫外扫描为均一多糖,不含蛋白质和核酸。
  
  GC、TLC及 IR分析 HPS-2的糖基组成和结构为,主要由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖5种单糖组成,其摩尔比为 0.3∶0.2∶2.7∶16.1∶2.0,单糖主要为吡喃糖,异头碳以 β型为主,并有少量的 α型。这为红芪多糖的深入研究打下了理论基础,特别为其组成的快速分析提供了可靠的方法。

【参考文献】
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  [3]李知敏,王伯初,周 菁,等. 植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比较分析[J].重庆大学学报,2004,27(8):57.

  [4]董 群,郑丽伊,方积年. 改良的苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究[J].中国药学杂志,1996,31:550.

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  [6]张维杰.复合多糖生化研究技术[M].上海:上海科学技术出版社,1987:10.
 
  [7]Yang XB,Zhao Y,Lv Y. In vivo macrophage activation and physicochemical property of the different polysaccharide fractions purified from Angelica sinensis[J].Carbohydrate polymers. 2008,71:372

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