解毒利尿颗粒水提工艺的正交实验法优选

               作者：杜树山，张铮，沈圣民，张海鸣，曹杰，关铭

【摘要】  目的优选解毒利尿颗粒的最佳水提取工艺。方法以干膏量、甘草酸提取量为评价指标，选择加水量、提取时间、提取次数为考察因素，利用L9(34)正交实验确定解毒利尿颗粒的水提取工艺。结果最佳提取工艺为加水10倍量，提取3次，2 h/次。结论优选出的提取工艺简单、可行，可作为该制剂合理开发的依据。

【关键词】  解毒利尿颗粒;提取工艺;正交实验

　解毒利尿颗粒由生甘草、白茅根、赤芍、紫苏叶、生姜、猪苓等6味药材组成，具有清热解毒、利尿等功效。临床上主要用于不明原因的中毒。因本品具有减轻中毒症状的作用，可为临床诊断确定中毒原因提供时间。根据处方中药材的主要有效成分的性质、处方的功能主治、临床用药经验、预实验结果、工厂生产实际和参考有关文献[1~3]，本实验采用正交实验设计对方中甘草等药材的水煎煮工艺，进行了考察，以甘草中甘草酸的含量和出膏量为指标，优选提取工艺。

　　1仪器与试药

　　1.1仪器Waters1525高效液相色谱仪(配Waters2487紫外可见检测器);MeLLennium32色谱工作站;METTER Toledo AG135 1/10万电子分析天平(瑞士METTER公司);KQ-250DB数控型超声波清洗器(昆山市超声仪器公司);电热恒温水浴锅(北京市长风仪器仪表公司);98-1-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司);101A-3E型电热鼓风干燥箱(上海实验仪器厂有限公司)。

　　1.2试药与试剂甘草酸铵对照品(中国药品生物制品检定所，批号为：110731-200511);所用药材购于同仁堂药店，经鉴定[4]甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch的干燥根，白茅根为禾本科植物白茅Imperata cylindrica Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb.的干燥根茎，赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia Iactiflora Pall.的干燥根，紫苏叶为唇形科植物紫苏Perilla frutescens(L.)Britt.的干燥叶，生姜为姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的新鲜根茎，猪苓为多孔菌科真菌猪苓Polyporus umbellatus(Pers.)Fries的干燥根;甲醇为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2.1 正交实验设计经过预试验，多方考察影响水煎煮的因素，选择加水量、提取时间、提取次数为影响水煎煮的主因素，以甘草酸含量及出膏量为评价指标，用L9(34)正交表安排实验，因素水平表与正交实验设计见表1~2。

　　2.2提取液的制备称取生甘草、白茅根、赤芍、紫苏叶、生姜、猪苓共9份，加入水，按表2进行实验，得水提取液，分别浓缩并定容至100 ml，摇匀，即得。表1因素水平表2正交实验表

　　2.3甘草酸的含量测定[4]色谱条件：色谱柱为Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm ，5 μm);流动相为甲醇-0.2 mol·L-1醋酸铵水溶液-冰醋酸(67∶33∶1);检测波长250 nm;柱温30℃;流速1.0 ml·min-1;理论板数按甘草酸峰计算应不低于2 000。对照品溶液的制备：取甘草酸铵对照品适量，精密称定，加流动相制成每毫升含0.2 mg(折合甘草酸为0.1959 mg)的溶液。供试品溶液的制备：精密吸取提取液10 ml，转移至100 ml量瓶内，加乙醇稀释至刻度，超声处理(功率：250 W，频率：40 kHz)30 min，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

　　2.4出膏量的测定精密吸取50 ml提取液并转移至已称重的干燥蒸发皿中，水浴蒸至近干，置70℃的烘箱进行减压干燥至恒重，计算出膏量。