三七皂苷R1体外透皮吸收累计渗透量的研究
作者：汪新芳，汪冰，王平，龚彦胜，韩莉，孙虎，曲永胜
【摘要】 目的综述近年来三七皂苷R1研究进展，阐述三七皂苷R1透皮吸收的可能性，为扩大其临床应用、开发新型制剂提供实验依据。方法该实验采用高效液相色谱仪检测三七皂苷R1 体外透皮吸收累积渗透量，实验结果经统计学处理。结果三七皂苷R1 24 h的累计渗透量为0.108 8 mg·ml-1,累计透皮率约为4.35%。结论三七皂苷R1 可以透过皮肤被吸收，本实验为研制三七皂苷R1的新型透皮制剂打下了实验基础。
【关键词】 三七皂苷R1;透皮吸收;累计渗透量
透皮吸收制剂是无创伤性给药的新途径[1]，不仅能够避免口服给药等可能发生的不良反应，降低毒副反应，而且使用方便,近年来透皮吸收制剂的开发研究日益受到重视。三七皂苷R1是从中药三七中提取的有效活性物质[2]，现代药理学研究证明三七皂苷在心脑血管系统方面具有较好的生理活性, 近年来出现了一些三七的新剂型，与传统的剂型相比具有方便、安全、见效快、易于携带等优点,但目前尚未见到透皮吸收制剂的上市。本试验研究三七皂苷R1体外透皮吸收累积渗透量，为新型透皮吸收制剂的研制打下了实验基础。
1仪器与材料
1.1仪器自制franz扩散池，高效液相色谱仪。
1.2药品及试剂受试药物：三七透皮制剂。三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所,批号：07452200007,纯度>98%,分子式C48H82O18,相对分子质量947112)。
1.3动物昆明种小鼠,体质量(20±2)g,雌雄各半,购自山东大学实验动物中心，合格证号：2004003004号。
2方法
2.1色谱条件Lab Alliace高效液相色谱仪：Lichrospher C18 (4.6 mm×150 mm，10 nm 5 μm);流动相:乙腈-水-磷酸 (25∶75∶0.05);流速:1.0 ml·min-1;进样量:20 μl;检测波长:205 nm。
2.2三七皂苷R1标准曲线的测定三七皂苷R1对照品储备溶液：精密称取三七皂苷R1 40.2 mg置10 ml容量瓶中,加甲醇适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。三七皂苷R1对照品溶液：分别精密取三七皂苷R1对照品储备溶液0.5 ml置10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。取储备液0.01，0.04，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml分别置于10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸20 μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图(见图1)。峰面积与进样量关系结果如下:三七皂苷R1线性方程: A = 2 037 498C - 4 226.57,r= 0.998 8,线性范围:0.004 02 ～0.402 0 mg·ml-1。结果表明在各自的线性范围内三七皂苷R1的峰面积与溶液浓度线性关系良好。
2.3精密度实验精密吸取标准品对照液 20 μl，在上述色谱条件下连续进样 6 次，计算相对标准偏差，结果表明RSD不超过3%, 符合规定标准，说明仪器系统的精密度良好。结果见图1。图1三七皂苷R1的标准曲线
2.4回收率实验取三七皂苷R1对照品储备溶液(浓度：4.002 mg·ml-1)0.02，0.10，0.50 ml各三份，分别置10 ml容量瓶中;加0.9%氯化钠溶液稀释至刻度，摇匀，并标记为1.2.3号样品，精密吸20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算回收率。结果见表1。表1三七皂苷R1的加样回收率实验
2.5三七皂苷R1透皮吸收累计渗透量的测定
2.5.1准备透皮吸收装置[3]按照改良franz扩散池的图纸自制透皮吸收装置，将三七皂苷透皮制剂平铺于吸收池上方，中间为小鼠皮肤，下层为接受液。
2.5.2制备小鼠角质层皮肤取体质量为18～22 g昆明种小鼠，雄性，用眼科手术剪沿鼠毛根部将腹部的鼠毛清理干净，然后脱颈椎处死后,马上将鼠皮浸泡于生理盐水中，15 min后捞出，贴于小烧杯外壁，用脱脂棉快速将鼠皮皮下组织和脂肪擦去，作为受试皮肤。受试皮肤每次试验现用现制。