酶法提取仙人草黄酮类化合物的研究

　　纤维素酶的活性与pH值密切相关，pH值不仅能够影响酶的构象，也能影响底物的解离状态，从而对酶活力产生影响。纤维素酶的活性在微酸性环境下较好，所以设计pH值分别为4，4.5，5，5.5，6五个pH值水平的实验，考察pH值对黄酮类化合物得率的影响。酶解温度50℃，酶浓度10 U/ml，酶解时间2.5 h，不同的酶解pH值进行提取，结果见图4，最适pH=4.5。图3 酶解时间和黄酮类 图4 酶解pH值和黄酮类化合物提取得率的关系 化合物提取得率的关系

　　3.2 最适酶解条件的确定由表3可知，最佳酶解条件为酶浓度10 U/mL，酶解温度50℃，酶解pH值4.5，酶解时间2.5 h，此酶解条件为最优组合。方差分析表明，因素A(酶解温度)、因素C(酶解时间)高度显著，因素D(酶浓度)较显著，因素B(酶解pH值)不显著。表3 L16(45)正交结果表4 方差分析表

　　3.3 加酶提取与传统提取方法的比较从表5可知，加酶处理提取(1组)比未加酶处理提取得率分别提高了9.79%(2组)和9.604%(3组)，酶法辅助提取效果较明显。表5 3种提取方法的结果比较

　　4 结论

　　酶解辅助提取过程分为酶解和乙醇加热回流提取两部分，对酶解过程的影响因素，如酶浓度，酶解温度，酶解pH值，酶解时间逐一考察，并进行正交实验以确定最佳酶解条件的组合。在最佳酶解条件下酶解辅助提取与传统乙醇回流提取进行比较，比较两者的提取得率。

　　本实验建立酶解法与醇提相结合的提取方法，确定了最佳酶解条件为酶浓度10 U/ml，酶解温度50℃，酶解pH值4.5，酶解时间2.5 h，获得了较好的效果，用酶解预处理后，再用乙醇提取，仙人草黄酮类化合物的得率比直接醇提提高了9.79%，能够有效利用仙人草资源。

　　酶法辅助提取方法用于中草药的提取，操作简便，成本低廉，并具备大生产的可行性。目前，应加强酶处理技术应用于中草药工业生产的研究，推动中药现代化。

【参考文献】
  　[1] 刘晓庚，陈梅梅. 中国仙草的开发利用研究[J]. 食品研究与开发， 2004， 25(5): 109.

　　[2] 杨 敏，冯 磊，柯雪琴，等. 仙草多糖对大鼠肝匀浆脂质过氧化的实验研究[J].浙江预防科学， 2002， 14(12):4.

　　[3] 李建华. 台湾仙草及其栽培利用[J]. 台湾农业探索， 2000， 12: 37.

　　[4] 柳占彪，王 鼎，王淑珍，等. 齐墩果酸的降糖作用[J]. 中国药学杂志， 1994， 29(12):725.

　　[5] 吴小林， 戴 敏， 关卫兵，等.仙草中提取仙草胶及其胶性能测定[J]. 中药材， 2008， 31(9): 1421.

　　[6] 尹怀霞， 黎锡流， 朱良从. 仙草中提取仙草胶的研究[J]. 现代食品科技，2006， 22(3):134.

　　[7] 何际婵.浅谈酶法在中草药提取中的应用[J].中医药学刊，2005，23(9):1717.

　　[8] 陈炳华，张其清，谢必峰，等.酶解法对山楂总黄酮提取及含量分析的影响[J].福建师范大学学报(自然科学版)，1997，13(4):90.

　　[9] 丛 伟.酶法提取银杏叶中总黄酮的研究[J].山西食品工业，2000，1:13.

　　[10] 邢秀芳，马精云，于容芬，等.纤维素酶在葛根总黄酮提取中的应用[J].中草药，2001，32(1):37.

　　[11] 吴梅林，周春山，陈龙胜，等. 酶法提取银杏黄酮类化合物研究[J].天然产物研究与开发，2004，16(6)：557.

　　[12] 王 晓，耿岩玲，李福伟，等. 酶法提取牡丹花总黄酮[J].山东科学，2005，18(4)：14.