柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响

【摘要】  目的探讨柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。方法血小板悬液与柚皮素孵育5 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用1 min，用NIKON TE2000-E荧光倒置显微镜观测血小板聚集情况。结果柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集有抑制作用，当柚皮素的浓度分别为80，160，320和640 μmol/L时，对血小板聚集的抑制作用随浓度的加大而增强。结论柚皮素具有抗血小板聚集的作用，而且作用的强度与柚皮素浓度正相关。

【关键词】  柚皮素; 血小板聚集; 凝血酶

　　柚皮素(naringenin，NGEN)，是一种从柑橘类水果、普洱茶籽、长白瑞香等植物中提取的天然苦味化合物[1]。近年来，对柚皮素的研究日益增多，发现其具有多种药理活性[2]。而柚皮素是否对血小板聚集也起作用，我们采用体外血小板聚集法，利用凝血酶为诱导剂，用荧光倒置显微镜观察柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。现将结果报道如下。

　　1 材料与仪器

　　1.1 动物大白兔4只，♂♀兼用，体质量(2.0±0.2)kg，由广东医学院动物中心提供。

　　1.2 药品和试剂柚皮素、凝血酶、N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(Hepes)购自Sigma公司。其余为国产分析纯或生化纯试剂。

　　1.3 仪器NIKON TE2000-E荧光倒置显微镜，德国。

　　2 方法

　　参照文献[3]：兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol/L 柠檬酸钠，111 mmol/L葡萄糖，53 mmol/L 柠檬酸) 0.15体积比抗凝，800r/min离心10 min，离心2次，取上清，3 000 r/min离心15 min。沉淀中加Tyrode-Hepes缓冲液(140 mmol/L 氯化钠， 5 mmol/L 氯化钾，1 mmol/L氯化镁， 10 mmol/L N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸，10mmol/L 葡萄糖，pH 7.4)调节至血小板数为3×1011～4×1011/L。血小板聚集用NIKON TE2000-E荧光倒置显微镜来观测。血小板悬液(0.2 ml)与药物孵育 5 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用1 min，观测聚集情况。

　　3 结果

　　显微镜下空白对照观测到血小板松散(见图1)， 凝血酶(500 U/L)诱导的血小板聚集，显微镜下观测到聚集粘连成一片(见图2)，用柚皮素作用后，随着药物浓度的增加，血小板没有聚集集合粘连(见图3～6)。