不同采收期头花蓼药材指纹图谱相似度评价

                  作者：王祥培，吴红梅,王祥森，刘霞

【摘要】  目的对不同采收期头花蓼药材进行指纹图谱相似度评价,探索最佳采收期。方法用RP-HPLC(DAD)法，梯度洗脱，测定不同采收期头花蓼的指纹图谱，并作相似度比较分析。结果不同采收期头花蓼的指纹图谱有明显差异。结论应注意不同采收季节对头花蓼药材的质量影响。

【关键词】  头花蓼药材; HPLC指纹图谱; 相似度

　头花蓼为蓼科植物头花蓼Polygonum capitatum Buch.-Han.ex D.Don的干燥全草或地上部分，具有清热利湿，解毒止痛，活血散瘀以及利尿通淋之功效，主治泌尿系统感染、血尿、湿疹、肾盂肾炎等症[1]。目前测定不同产地、不同采收期头花蓼药材中化学成分的含量已有研究报道[2～5]，但头花蓼化学成分复杂，并且随着采收期的不同存在差异。因此，为了更全面评价头花蓼药材质量和控制质量的稳定性，本文对不同采收期共15批头花蓼药材进行了高效液相指纹图谱研究，并采用国家药典委员会推荐使用的“中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A)”对不同采收期头花蓼药材的指纹图谱进行相似度评价,并以相似度数据进行系统聚类分析，以期为头花蓼最佳采收期的确定提供参考。

　　1 材料与仪器

　　1.1 材料采自西藏墨脱县墨脱镇，共15批，经贵阳中医学院王祥培副教授鉴定为蓼科植物头花蓼Polygonum capitatum Buch.-Ham.ex D.Don的干燥全草。具体见表1。没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0638-9501)，槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：081-90003)，槲皮苷对照品(自制，纯度﹥98%);乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸镏水。

　　1.2 仪器Agilent1100型高效液相色谱仪(自动进样品)，二极管阵列检测器(DAD);《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》(国家药典委员会)。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件采用依利特Hypersil ODS色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)，乙腈-0.4%磷酸二元梯度洗脱，体积流量：0.8 ml/min，检测波长：310 nm，柱温25℃。

　　2.2 流动相条件[6]0～5 min：乙腈 0%～5%，0.4%磷酸 100%～95%;5～55 min：乙腈 5%～25%，0.4%磷酸 95%～75%;55～70 min：25%～30%，0.4%磷酸 75%～70%;70～80 min：乙腈 0%，0.4%磷酸 100%;80～85 min：乙腈 0%，0.4%磷酸 100%。

　　2.3 供试品溶液的制备[6]取头花蓼细粉(3号筛)2 g，精密称定，置圆底烧瓶中，分别加100 ml 80%乙醇，置水浴中加热回流2 h,滤过，残渣加100 ml 80%乙醇回流提取1 h，滤过，合并滤液。滤液置蒸发皿中挥干，残渣加80%乙醇定容置10 ml容量瓶中。用微孔滤膜(0.45 μm) 滤过,取续滤液,即得。

　　2.4 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸、槲皮素和槲皮苷对照品适量，加50%甲醇溶解分别制成0.031 5，0.028 1和0.061 3 mg/ml 的溶液,即得。

　　2.5 指纹图谱方法学考察[6]

　　2.5.1 精密度实验取同一份供试品溶液，重复进样6次，测得各共有色谱峰相对留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明精密度良好。

　　2.5.2 稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在0，2，6，12，20，30 h进行检测，测得各共有色谱峰相对保留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明样品溶液在30 h内稳定。

　　2.5.3 重复性实验取同一采收期的供试品5份，精密称量，按“2.3”项下制备供试品溶液，分别进样，测得各共有色谱峰相对留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明重复性良好。

　　2.6 指纹图谱建立 精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，按选定的色谱条件，进行检测。同一实验条件下，测定所有供试品HPLC色谱图。根据不同采收时间供试品测定结果所给出的峰数、峰值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相关参数进行分析、比较，制定优化的指纹图谱，见图1。图1 不同采收期头花蓼药材指纹图谱