苦豆子总碱对家兔离体肺动脉血管作用机制的研究
作者：牛彩琴，买文丽，张团笑
【摘要】 目的研究苦豆子总碱(total alkali Sophora alopecuroids L, TASa)舒张家兔离体肺动脉血管的作用机制。方法采用离体恒温灌流浴槽，以去甲肾上腺素(noradrenaline, NA)预收缩后，给予TASa(2.5，5.0，10，20 mg/L)观察其舒张血管的量效关系;将标本分为对照组、TASa组、TASa+吲哚美辛(10-5 mol/L)、TASa+普萘洛尔(10-5 mol/L)、TASa+左旋硝基精氨酸(10-4 mol/L)和TASa+去内皮细胞6组探讨TASa舒张血管的机制;用TASa(20 mg/L)温育标本后，观察TASa对NA (10-8～10-5 mol/L)和KCl(6.3～100 mmol/L)量效收缩曲线的影响。结果TASa能舒张肺动脉血管，有量效依赖性(r=0.75， P<0.01);去内皮、左旋硝基精氨酸、吲哚美辛和普萘洛尔对TASa舒张血管的作用无明显影响;TASa能压低NA和KCl的量效收缩曲线。结论TASa可能是拮抗Ca2+通道，降低胞浆Ca2+而使血管舒张。
【关键词】 苦豆子总碱; 肺动脉; 内皮细胞; 钙离子
苦豆子Sophora alopecuroides L.为豆科槐属植物，味苦性寒，有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫等作用[1]。苦豆子总碱(Total alkali Sophora alopecuroids L., TASa)是从豆科植物苦豆子的干燥全草和种子提取的总生物碱，主要有苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱等，其总碱具有清热解毒、祛风燥湿作用[2，3]。静脉注射氧化苦参碱、槐果碱均可使麻醉大鼠和犬产生快速、可靠的降压效果，槐胺碱对麻醉猫、兔和大鼠有降压作用，并有明显的剂量依赖关系[4]。为探讨TASa降低血压的机制，本实验采用离体恒温灌流浴槽，观察TASa对去甲肾上腺素(noradrenaline, NA)预收缩血管张力的影响，并探讨其作用机制。
1 材料与仪器
1.1 动物清洁级健康家兔12只，体质量2.5～3.0 kg，雌雄不拘，由兰州生物制品研究所提供，合格证号医动字第14-004号。
1.2 药物与试剂TASa购于兰州大学第一附属医院，批号：甘卫药灭制准字(97)022-02，苦豆子总碱≥95%。用生理盐水配制成5，10，20 g/L备用，用NaHCO3配制pH 7.4;乙酰胆碱acetylcholine (Ach)和普萘洛尔propranolol (Prop,均为北京第二制药厂产品);左旋硝基精氨酸Nω-nitro-L-arginine (L-NNA)和吲哚美辛indomethacin (Indo,均为Sigma公司产品);去甲肾上腺素noradrenaline(NA，上海禾丰制药有限公司);Krebs-Henseleit (K-H)液的成分等其他试剂均为化学分析纯。
1.3 仪器六套离体恒温灌流肌槽(兰州大学化学系玻璃仪器厂研制);IBM电脑两台，内置Biolap410(BL-410)智能型生物信号处理系统(成都泰盟电子有限公司研制);张力传感器(JH-2，中国北京航天医学工程研究所)。
2 方法
2.1 标本制备猛击家兔头部致昏后，迅速取出肺动脉，放置于盛有K-H液的培养皿中，并持续通入95%O2和5%CO2混合气体，剔去周围结缔组织后制成长2.5～3.0 mm肺动脉环[5]，置于37 ℃恒温的灌流浴槽中，持续通入95%O2和5%CO2混合气体，经张力换能器将肺动脉环的张力变化输入配有BL-410系统的电脑进行记录和处理，给予2 g的前负荷。每20 min更换一次K-H液(37 ℃)，温育平衡1.5～2.0 h，待肺动脉环稳定后加入NA(10-6 mol/L)检验血管环的反应性，收缩良好的用于实验。
检验血管内皮的完整性时，待肺动脉环稳定后加入NA(10-6 mol/L)使血管环收缩达最大坪值，再加入Ach(10-5 mol/L)，若其舒张率大于30%，认为是内皮完整的[6]。在观察去除内皮的血管环时，用棉签在肺动脉环内壁轻轻地来回滚动，可去除内皮细胞，用Ach(10-5 mol/L)检验其舒张率小于10%，认为是去内皮细胞(Denuded endothelium, Denude) [6]。
2.2 分组及处理
2.2.1 TASa对NA预收缩血管张力的影响记录静息肺动脉血管环张力后，用KCl(60 mmol/L)刺激达坪值，然后用K-H液冲洗，重复3次。待重新稳定后，分别加入NA(10-6 mol/L)使肺动脉环收缩达坪值(以此为100%效应)后开始实验。对照组加入等量生理盐水;TASa组是累积加入TASa(2.5，5.0，10，20 mg/L);TASa+吲哚美辛，TASa+普萘洛尔，TASa+左旋硝基精氨酸，TASa+去内皮细胞4组先分别加入Indo(10-5 mol/L)，Prop(10-5 mol/L)，L-NNA(10-4 mol/L)温育标本15 min和去血管内皮细胞(Denude)后，加入NA(10-6 mol/L)使血管环收缩达坪值，累积加入TASa(2.5，5.0，10，20 mg/L)测各组的血管张力并计算舒张(%)。
2.2.2 TASa对NA和KCl量效曲线的影响肺动脉环在去除内皮细胞的情况下，向浴槽分别累积加入NA (10-8～10-5mol/L)或KCl(6.3～100 mmol/L)后，测其收缩张力(g)，此为对照组;冲洗后加入TASa(20 mg/L)温育15 min后，再做NA和KCl 的量效曲线，方法同对照组。
2.3 观测指标血管舒张率(%)=(正常效应值-药物效应值)/正常效应值;血管收缩张力(g)=效应值-前负荷值;亲和力指数即pD2[7]=-logKD=log(1/KD)。
2.4 统计学分析所有数据均以±s表示，采用SPSS.11.0软件进行方差分析或t检验，以P<0.05为有统计学意义。
3 结果
3.1 TASa对NA预收缩肺动脉环的影响TASa可显著舒张内皮完好的肺动脉环，并有剂量依赖关系(r=0.75，P<0.01);用L-NNA，Indo，Prop温育或去内皮后，对TASa舒张血管作用无明显影响(表1)。
3.2 TASa对NA和KCl 量效曲线的影响TASa能明显抑制NA和KCl 对血管环的收缩作用，且亲和力指数(pD2)分别由温育前的(7.13±1.56)和(1.30±0.54)降为温育后的(6.07±1.78)和(1.12±0.95)。见图1。表1 阻断剂对TASa舒张血管作用的影响图1 TASa对NA和KCl量效曲线的影响