商品肉豆蔻药材的指纹图谱研究
【摘要】 目的 建立商品肉豆蔻药材甲醇提取液的指纹图谱分析方法,以考察不同地区市售肉豆蔻药材质量的均一性。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：甲醇-乙腈-水(25∶35∶40),流速1 mL/min,柱温：30 ℃；检测波长：270 nm。以去氢二异丁香酚为参照物。结果 建立了肉豆蔻药材的指纹图谱,共有17个共有峰,指纹图谱相似度均在0.9以上。结论 不同地区市售的商品肉豆蔻药材无差异性,该法准确、可靠,为肉豆蔻药材的质量控制提供了科学依据。
【关键词】 肉豆蔻；去氢二异丁香酚；指纹图谱；高效液相色谱法
Key words：nutmeg；dehydrodiisoeugenol；fingerprint；HPLC
肉豆蔻为肉豆蔻植物肉豆蔻Myristica fragrans houtt.的干燥种仁[1]。由于受到产地来源、贮存时间不详、质量控制标准较低等原因影响,因此,肉豆蔻药材内在质量的稳定、均一、可控研究尤为重要。本试验采用高效液相色谱法(HPLC),以不同地区商品肉豆蔻药材为研究对象,建立其甲醇提取液的指纹图谱分析方法,该法简便、灵敏、准确,为肉豆蔻药材的质量标准研究提供了科学依据。
1 材料
1.1 仪器
Agilent1100高效液相色谱仪(chemistation system工作站)。
1.2 试药
去氢二异丁香酚对照品[2],沈阳药科大学提供,经高效液相色谱法面积归一化法测定,纯度>98.0%；肉豆蔻药材购于不同地区,经鉴定为肉豆蔻科植物肉豆蔻(Mystica fragrans Houtt.)的干燥种仁,肉豆蔻对照药材购于中国药品生物制品检定所,批号120926-200304。甲醇、乙腈为色谱纯,水为重蒸水。
1.3 数据处理软件
国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004)
A版(中南大学设计)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：甲醇-乙腈-水(25∶35∶40),流速1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：270 nm。
2.2 参照物溶液的制备
精密称取去氢二异丁香酚对照品适量,加甲醇制成每1 mL含去氢二异丁香酚0.10 mg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取肉豆蔻粉末(过40目筛)0.5 g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,超声处理30 min,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液过0.45 μm滤膜,即得供试品溶液。
2.4 检测方法
参照[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录ⅥD]试验,分别精密吸取参照物溶液及供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,记录70 min的色谱图,即得。
2.5 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液10 μL,在所建立的测定条件下连续进样5次,采用中药色谱指纹图谱的相似性计算软件计算,结果5次进样的色谱图其相似度均为0.9以上,表明仪器精密度良好,符合指纹图谱要求。
2.6 重复性试验
精密称取同一批样品各5分,分别按供试品溶液制备方法,精密吸取各供试品溶液10 μL,分别注入液相色谱仪,测定指纹图谱。采用中药色谱指纹图谱的相似性计算软件对5次测定结果进行计算,结果各供试品色谱图其相似度均为0.9以上,表明方法的重复性良好,符合指纹图谱要求。
2.7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液5 μL,按0、2、4、6、8、12、24 h所建立的测定条件进行检测,采用中药色谱指纹图谱的相似性计算软件对所得结果进行计算,其相似度均为0.9以上,结果表明,在24 h内肉豆蔻的色谱指纹图谱基本稳定,没有明显的变化,符合指纹图谱的要求。