还阳参化学成分的研究

                 作者：倪艳,卢方晋,郝旭亮,李先荣

【摘要】  目的 研究还阳参Crepis turczaniowii C.A.Mey.全草的化学成分。方法 采用硅胶、大孔吸附树脂及聚酰胺层析柱进行分离和纯化,通过理化、质谱及核磁共振等现代波谱技术鉴定化合物结构。结果 从还阳参石油醚部分分离得到2个化合物,分别鉴定为伪蒲公英甾醇乙酸酯(Ⅰ)、β-谷甾醇(Ⅱ)；从其正丁醇部分分离到1个化合物,鉴定为连翘苷(Ⅲ)。结论 化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均为首次从该植物中分离得到,Ⅲ为首次从还阳参属植物中分离得到。

【关键词】  菊科；还阳参；化学成分

    Abstract：Objective To study the chemical constituents in Crepis turczaniowii C. A. Mey. Method The constituents were isolated and purified by column silica, polystyrene resin RA and polyamide columbine chromatography, and the structures were identified by physicochemical data, MS and NMR. Result Two compounds were obtained in the Petroleum ether fractions as ω-taraxasteryl acetate (Ⅰ) and β-sitosterol (Ⅱ), and one compound was obtained in the n-BuOH fractions as phillyrin (Ⅲ). Conclusion All above compounds are obtained from the plants of Crepis turczaniowii C. A. Mey. for the first time. Ⅲ is isolated from Crepis L. for the first time.
   
　　Key words：Compsitea；Crepis turczaniowii C. A. Mey.；chemical constituent
 
    还阳参Crepis turczaniowii C.A.Mey.为菊科还阳参属植物,别名屠还阳参、驴打滚儿草,多年生草本植物,生长于山坡、路旁,主要分布在山西、内蒙古[1]一带,资源丰富,为民间习用草药。其味苦,性微寒,具有止咳平喘、清热降火、益气之功效,用于治疗支气管炎、肺结核、喘息性慢性支气管炎等疾病。有关其化学成分及生物活性,未见任何文献报道。药效学实验研究表明,还阳参全草的石油醚提取物能减少小鼠咳嗽次数,并能延长小鼠的咳嗽潜伏期,有明显的止咳作用；正丁醇提取物能保护组胺和乙酰胆碱对豚鼠引起的哮喘,具有平喘作用[2]。为了探寻其止咳平喘作用的物质基础,本实验对还阳参石油醚提取物和正丁醇提取物进行了化学成分的研究,结果从石油醚部分分离得到两个化合物,分别为伪蒲公英甾醇乙酸酯(ω-taraxasteryl acetate,Ⅰ)、β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅱ)；从正丁醇部分分离到一个化合物,鉴定为连翘苷(phillyrin ,Ⅲ),化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ都是首次从植物还阳参中分离。

　　1  实验材料
  
　　Yanaco显微熔点测定仪(未校正)；瑞士Bruker IFS-55型红外分光光度计；瑞士Bruker-ARX-300型核磁共振仪；美国菲尼根LCQ-MS质谱仪。聚酰胺(柱层析用,80～100目,浙江台州市路桥四甲生化塑料厂)、大孔吸附树脂(D-101型,16～60目,天津农药股份有限公司树脂分公司)、硅胶(柱层析用,160～200目,青岛海洋化工有限公司)。其他试剂均为分析纯。还阳参药材采集于山西省山阴县(采集时间8－9月份),
经山西省药品检验所高天爱主任药师鉴定为菊科植物还阳参Crepis turczaniowii C. A. Mey.的全草。

　　2  提取分离

    还阳参粗粉4 kg,以70%的乙醇加热回流提取3次,合并提取液,减压浓缩得到浸膏。用适量水分散,依次用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取,减压回收溶剂并浓缩,分别得到石油醚部分(99 g)、醋酸乙酯部分(48.6 g)、正丁醇部分(114.5 g)。取石油醚部分20 g,加乙醚适量使溶解,用硅胶拌匀,乙醚自然挥干,上硅胶柱,以石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱,得3个流份,再经反复硅胶柱层析分别得化合物Ⅰ(30 mg)、Ⅱ(20 mg)。取正丁醇部分10 g,加水搅拌,使混悬,静置2 h,取上清液,加入处理好的D-101型大孔吸附树脂柱,依次以水、30%、60%、95%的乙醇洗脱,紫外检测器跟踪检测,收集洗脱液,减压回收溶剂,得到4个不同浓度乙醇洗脱流分,将其中30%乙醇洗脱流份经聚酰胺柱层析和反复硅胶柱层析,得到化合物Ⅲ(40 mg)。

　　3  结构鉴定

    化合物Ⅰ为无色针状结晶(醋酸乙酯),mp 238～240℃, Libermann-Burchard反应阳性,TLC喷10% H2SO4,加热后显紫红色。易溶于氯仿、乙醚,微溶于甲醇、丙酮。IRvKBrmax cm-1：1 731、1 247、2 943、2 850、1 640 cm-1。1H-NMR(CDCl3)δ：4.46 (1H,t,C21-H),2.03(3H,s,CH3-CO),1.05,0.995,0.956,0.922, 0.895,0.826,0.748(21 H,m,7×CH3)。EI-MS(m/z)：468(M+)、453(M-CH3)、408(M-CH3CO-H2O)、393、249、204、189。与伪蒲公英甾醇乙酸酯对照品薄层色谱Rf值[3]及显色行为一致。综合分析以上数据,并结合文献[4-5]对照,确证化合物Ⅰ为伪蒲公英甾醇乙酸酯。
    
　　化合物Ⅱ为无色针状结晶(石油醚-氯仿),易溶于氯仿、乙醚,mp137～138 ℃,Libermann-Burchard 反应阳性。在数种不同展开剂条件下进行薄层层析,其Rf值与β-谷甾醇对照品一致,并且与对照品混合后展开,只显示一个斑点。综合上述分析,故鉴定该化合物为β-谷甾醇。
   
　　化合物Ⅲ为白色粉末,mp 148～150 ℃,molish反应阳性,不溶于氯仿,微溶于甲醇,易溶于热甲醇。该化合物经酸水解后,PC鉴定有葡萄糖。IRvKBrmaxcm-1：3412,2923,2800,1744, 1614,1516,1448,1410,1261,1161,1075,1036,914,817。FAB- MS m/z(%)：533[M-1],372[M-glc]+。1H-NMR(C5D5N)δ：8.7 (1H,s,Ar–H),7.6-6.9(6H,m,arom H),3.75-3.68(9H,s,2O CH3), 4.66(1H,d,j=6.9Hz,glc-1H)。13C-NMR(C5D5N)δ：132.2 (C-1), 136.3(C-1'),110.5(C-2),111.1(C-2'),148.0(C-3),149.0(C-3'),147.5(C-4,C-4'),112.4(C-5),116.3(C-5'),118.4(C-6), 119.1(C-6'),82.3(C-7),87.9(C-7'),50.5(C-8),55.2(C-8', OCH3),71.3(C-9,C-9'),55.9(2O CH3),Glc：102.3(C-1),74.9 (C-2),78.6(C-3),70.0(C-4),78.9(C-5),62.0(C-6)。化合物Ⅲ的13C-NMR和1H-NMR波谱数据与文献[6]的连翘苷的数据比较,两者基本一致。因此鉴定化合物Ⅲ为连翘苷。

【参考文献】
  　　[1] 《全国中草药汇编》编写组.内蒙古中草药[M].北京：人民卫生出版社,1985.

　　[2] 刘振权.还阳参有效部位止咳平喘作用的研究[D].山西省中医药研究院硕士研究生毕业论文,2002.5.

　　[3] 凌 云.中药蒲公英的理化鉴别研究[J].西北药学杂志,1999,12(14)：250.

　　[4] P L Majumder.Chemical Constituents of Launaea nudicaulis：C-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy of Taraxasterenes and Pseudo-Taraxasterenes[J].J Indian Chem Soc,1982,7：881－883.

　　[5] 凌 云.蒲公英三萜类化学成分的研究[J].中草药,1998,29(4)：224.

　　[6] 石 钺.银翘散抗流感病毒有效部位群化学成分的分离与鉴定[J].中国中药杂志,2001,28(1)：43－46.