加味当归补血汤对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响
作者：张奉梅，龚继勇，龚继梅，王兴武
【摘要】 目的通过加味当归补血汤（简称中药）对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响，探讨中药在肿瘤转移中的作用及其机制。方法昆明种小鼠随机分为空白组、模型组和中药组，空白组为健康小鼠，给予生理盐水灌胃；模型组和中药组为H22荷瘤小鼠动物模型，分别给予中药（中药组）和生理盐水（模型组）灌胃，喂养10 d和20 d后，检测各组小鼠全血粘度、血小板最大聚集率、T细胞亚群，计算抑瘤率、胸腺及脾脏指数。结果中药组小鼠的血液黏度（高切变、低切变）、血小板最大聚集率均较模型组降低，差异有显著性（P＜0.05），灌胃20 d时血小板最大聚集率变化更明显（P＜0.01）；而胸腺和脾脏指数、T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+)，中药组较模型组均增高（P＜0.05）；中药组的抑瘤率高达32.6%。结论加味当归补血汤对荷瘤小鼠具有改善血液流变学及增强免疫功能的作用，这可能是其抑制肿瘤生长和转移的机制之一。
【关键词】 加味当归补血汤； H22荷瘤小鼠； 血液流变学； 免疫功能
肿瘤的发生发展与血液流变学及机体免疫状态密切相关。恶性肿瘤患者血液呈高凝状态，血流缓慢，脱落的肿瘤细胞不易被冲刷而附壁，产生的血栓也易产生涡流，为分散的癌细胞提供了整合、黏附机会。人体的免疫系统能监视机体内出现的突变细胞及早期肿瘤，并予以清除，T淋巴细胞亚群在人体细胞免疫反应中有着重要的作用。研究显示加味当归补血汤用来辅助放化疗，具有升白、保肝、提高免疫功能的作用［1～3］。本实验通过观察加味当归补血汤对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响，探讨中药在肿瘤生长和转移中的作用及其机制。
1 材料与仪器
1.1 动物及药品健康昆明种小鼠60只，4～6周龄，雄性，体质量18～22 g，由山东鲁抗实验动物中心提供（合格证书号：SDXK鲁20070145）。加味当归补血汤（黄芪、当归、灵芝、鸡血藤、补骨脂等），相当于生药1.5 g/ml，由山东省肿瘤医院制剂中心生产，批号：070318。大鼠抗小鼠T细胞表面标记单克隆抗体（抗CD3、抗CD4）购于steroetc公司。
1.2 仪器
LBY-NJ6型旋转式血液粘度计，LBY-NJ2型血小板聚集仪，F-820血液分析仪，BECKMAN流式细胞分析仪。
1.3 瘤细胞株小鼠肝癌H22细胞株，由山东省肿瘤医院基础研究中心提供。
2 方法
2.1 荷瘤小鼠模型建立取小鼠肝癌H22细胞株制成细胞悬液，计数活细胞数后培养传代两次，将培养液离心得到肿瘤细胞。将肿瘤细胞稀释成2×107/ml浓度后接种到小鼠腹腔内，0.2 ml/只，瘤株在动物体内传代2次后，选择接种8 d腹部明显膨大的小鼠，抽取腹水，镜下进行细胞分类计数，瘤细胞数>95%，腹水用无菌PBS液稀释至2×107/ml，接种于小鼠背部近中线处，共40只，0.2 ml/只。
2.2 分组及给药肿瘤接种24 h后随机分为两组，荷瘤H22小鼠20只（模型组），加味当归补血汤组20只（中药组）；另外未造模的20只健康小鼠为空白对照组（空白组）。给予空白组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水0.5 ml/只，中药组给予加味当归补血汤灌胃0.5 ml/只。给药后分别于10 d，20 d每组各取10只小鼠，末次给药前禁食16 h，自由饮水，称重。
2.3 观察指标眶后静脉丛取血，肝素抗凝，腹腔注射麻醉，剥取肿瘤称重。测定各组小鼠全血黏度，包括低切变率和高切变率，测定血小板最大聚集率；按说明书操作应用流式细胞分析仪测定T细胞亚群（CD3+，CD4+）。取脾脏和胸腺称重，计算脾脏指数及胸腺指数。脏器指数和抑瘤率计数公式：脏器指数(mg/g)=脏器重量(mg)/体质量(g)；抑瘤率=(模型组平均瘤重-中药组平均瘤重)/模型组平均瘤重×100%。
2.4 统计学处理采用SPSS11.5软件进行分析，计量资料用±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有显著性意义。
3 结果
3.1 中药对荷瘤小鼠血液流变学的影响结果见表1。表1显示分组给药10 d和20 d后，中药组全血黏度（高切、低切）和血小板最大聚集率均较模型组降低（P＜0.05），20 d时血小板最大聚集率变化更明显（P＜0.01）；而模型组较空白组全血黏度和血小板最大聚集率升高（P＜0.05）；中药组和空白组各项指标比较差异无统计学意义（P＞0.05）。表1 各组小鼠血液流变学的变化(略)
3.2 中药对荷瘤小鼠免疫功能的影响结果见表2。结果显示灌胃20 d后，中药组T细胞亚群（CD3+、CD4+）较模型组升高，差异有显著性（P＜0.05）；胸腺指数、脾脏指数中药组较模型组也升高（P＜0.05）；而中药组和空白组比较差异无统计学意义。灌胃10 d各项指标变化不明显（P＞0.05）。表2 各组小鼠免疫功能的变化（略）