药物敏感性试验中不同方法灵敏度的比较及助溶剂的筛选
2.2 抗菌药物敏感性试验助溶剂的选择
2.2.1 不同浓度有机溶剂的制备取无菌试管6只，于第1管加入8 ml有机溶剂，2～6只管中加入无菌蒸馏水4 ml。将第1管取出4 ml加入第2管，混合后取出4 ml，加人第3管，再混合后取4 ml放人第4管，如此连续稀释至第5管取出4 ml弃去，第6管以无菌蒸馏水作空白对照。平行制备两份。
2.2.2 含有机溶剂营养琼脂培养基的制备将按方法“2.1.2”制备的营养琼脂培养基分装至试管中，每支试管中16 ml。
将按方法2.2.1制备的不同浓度的有机溶剂分别加入装有营养琼脂培养基的试管中，制成含有机溶剂浓度分别为20%，10%，5%，2.5%，1.25%，0%的营养琼脂培养基。
2.2.3 细菌接种按方法“2.1.5”中菌落计数法接种细菌。
2.2.4 结果观察于35 ℃培养箱中培养24 h，进行菌落计数。观察不同浓度有机溶剂对金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的抑制效果。
2.3 二甲基亚砜对头孢拉定药物敏感性试验的影响
2.3.1 所需药液的制备按方法“2.1.1”制备头孢拉定药液。
另取12支试管，用5%的DMSO代替蒸馏水，按“2.1.1”方法制备药液。平行制备两份。
2.3.2 含药营养琼脂培养基的制备及细菌的接种按方法“2.1.5”进行实验。
2.3.3 结果观察于35℃培养24 h，进行菌落计数。对比观察有无二甲基亚砜助溶剂对头孢拉定药物敏感性试验的影响。
3 结果
3.1 不同抗菌药物敏感性试验方法的选择结果表明，在头孢拉定药物敏感性试验中，纸片扩散法、琼脂二倍稀释法、琼脂二倍稀释与菌落计数相结合法3种方法的实验结果有较大差别。
在3种实验方法中，琼脂二倍稀释与菌落计数相结合法对头孢拉定药物敏感性试验的灵敏度最高，其次为琼脂二倍稀释法，纸片法灵敏度最低。
3种实验方法对金黄色葡萄球菌及对大肠埃希氏菌灵敏度结果相同。结果见表1。表1 头孢拉定药物敏感性试验中纸片扩散法、琼脂二倍稀释法、琼脂二倍稀释法与菌落计数相结合法3种方法实验结果
3.2 抗菌药物敏感性试验助溶剂的选择 结果表明，乙醇、丙酮、二甲基亚砜3种助溶剂对金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的生长均有一定影响。
对金黄色葡萄球菌的抑制效果由强到弱依次为：乙醇>丙酮=二甲基亚砜。相比之下，助溶剂对大肠埃希氏菌的抑制效果较对金黄色葡萄球菌的抑制效果更为明显，依次为：乙醇>丙酮>二甲基亚砜。其影响程度均随助溶剂浓度的降低而减小。结果见表2。表2 乙醇、丙酮、二甲基亚砜对金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌生长的影响
3.3 二甲基亚砜对头孢拉定药物敏感性试验的影响结果表明，在加入5%的二甲基亚砜助溶剂的情况下，所测头孢拉定对金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的MIC均与不加入二甲基亚砜组所测数值一致。结果见表3。证明浓度不超过5%的二甲基亚砜是一种稳定可靠的助溶剂。
4 讨论
自然界中存在多种细菌类型，大体可分为革兰氏染色阴性菌和革兰氏染色阳性菌两大类。本实验选择了革兰氏染色阴性菌的代表菌种大肠埃希菌和革兰氏染色阳性菌的代表菌种金黄色葡萄球菌作为实验对象，有较大的代表性。
常见的抗菌药物敏感性试验还有比浊法，但因比浊法不适用于带有颜色的药液，有一定的局限性，因此本实验没有将比浊法列入考查范围。除比浊法外的几种方法中，琼脂二倍稀释与菌落计数相结合的方法灵敏度较高，且基本可以排除药液颜色对试验结果的影响，提供较为准确的结果，适用于需精确测定药物最低抑菌浓度的实验。因此实验采用琼脂二倍稀释与菌落计数结合法作为考察抗菌药物敏感性试验最佳助溶剂的实验方法。表3 有无二甲基亚砜助溶剂在头孢拉定药物敏感性试验中的影响
比较乙醇、二甲基亚砜、丙酮三种常用助溶剂的理化性质，3种助溶剂的沸点分别为78.3，189 ，56.12 ℃。综合实验结果，二甲基亚砜自身性质相对较稳定，能与多种有机试剂相混溶，并且对金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的影响相对较小，是一种较为理想的助溶剂。
本实验以头孢拉定作为实验化合物，对比有无二甲基亚砜助溶剂两种情况下对药物敏感性试验的影响。所得两组实验结果吻合度较好，可证明在抗菌药物敏感性试验中，使用浓度低于5%的二甲基亚砜作为助溶剂是安全可靠的。
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