斑蝥酸钠对体外培养的人食管癌Eca109细胞中Bcl-2、p53基因表达的影响

【摘要】  目的研究斑蝥酸钠对体外培养的人食管癌Eca109细胞中Bcl-2、p53基因表达的影响。方法采用流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠处理前后人食管癌Eca109细胞中Bcl-2、p53基因表达的变化。结果不同剂量斑蝥酸钠作用24h均可使Bcl-2、p53基因在人食管癌Eca109细胞中的表达下降(p<0.01)。结论斑蝥酸钠可抑制Bcl-2、p53基因在人食管癌Eca109细胞中的表达。

【关键词】  斑蝥酸钠; Bcl-2; p53; 人食管癌Eca109细胞株

　斑蝥酸钠(Sodium cantharidinate,SCA)系斑蝥素的半合成衍生物，毒性、刺激性较斑蝥素轻，抗肿瘤作用明显优于斑蝥素[1]，且抗癌谱较广，临床单药或联合化疗对肝癌、胃癌、大肠癌等恶性肿瘤均有一定疗效 [2]，是一种广谱抗癌新药，但对斑蝥酸钠抗食管癌的基础研究较少。本实验已对其抑制人食管癌Eca109细胞生长,诱导细胞凋亡的作用进行了研究,为进一步探讨其诱导凋亡和抗肿瘤的机制，采用流式细胞仪检测斑蝥酸钠作用前后Bcl-2、p53基因在人食管癌Eca109细胞中的表达变化，观察斑蝥酸钠对Bcl-2、p53基因表达的影响,为其临床应用提供理论依据。

　　1 材料与仪器

　　1.1 试剂RPMI1640培养液：美国GIBCO;新生牛血清：杭州四季青生物工程材料有限公司;胰酶：南京生兴生物技术有限公司;斑蝥酸钠注射液:贵州神奇集团，批号20041113;顺铂(冻干型):齐鲁制药有限公司，批号04050111;Bcl-2，P53荧光标记单抗:美国BD公司，批号：556570。

　　1.2 细胞系人食管癌Eca109细胞株:购于上海细胞所。将细胞培养于含10%新生牛血清的RPMI1640培养液中，长满后用0.25%胰酶消化传代。

　　1.3 仪器CO2细胞培养箱:NAPCO，USA;FACSCaliuber型流式细胞仪:BD，USA。

　　2 方法

　　2.1 药液的制备及分组情况将斑蝥酸钠注射液用适量的无血清RPMI1640培养液分别配成3种浓度，大、中、小终浓度分别为5 000，2 500，1 000 μg·L-1，顺铂作为阳性对照其剂量按临床用量换算，终浓度为25 000 μg·L-1。实验共设用药组大、中、小3个浓度、阳性对照组和细胞对照组。

　　2.2 流式细胞仪检测取处于指数生长期的人食管癌Eca109细胞，加药培养24 h后，用适量0.02%EDTA进行消化，制成单细胞悬液，1 000 r/min离心，PBS洗涤2次，配成1×109·L-1细胞悬液，75%冷乙醇-20℃固定，上机测定前，离心去乙醇，用PBS洗涤2次，用0.5mlPBS悬浮细胞,制成细胞悬液，分别加入Bcl-2，P53荧光标记单抗，4℃避光染色30 min以上;用PBS洗细胞一次，弃上清，加PBS0.5 ml悬浮细胞，上机检测。

　　2.3 统计学处理本实验采用χ2检验分析。所有统计均用SPSS11.0统计软件包上进行。