白芍与当归或玫瑰花配伍对其芍药苷煎出量影响的比较研究
作者：丁里玉 胡树釗 李春香 郝蕾 丁芳 王亮 殷天照
【摘要】 目的研究白芍与当归或玫瑰花配伍对其芍药苷煎出量的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定芍药苷的含量。色谱柱:XDB C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：甲醇-水(40∶60)，检测波长230 nm，流速1.0/min，柱温25℃。结果白芍与当归、玫瑰花配伍后芍药苷的煎出量较单味药均显著提高(21%;69%)。结论当归或玫瑰花与白芍配伍，对其芍药苷煎出量均有显著促进作用，尤其是白芍配伍玫瑰花明显。
【关键词】 白芍; 配伍; 芍药苷; 高效液相色谱法
白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactifora Pall.的干燥根，味甘、酸、苦，微寒，归肝、脾经，具有养血敛阴，柔肝止痛，平抑肝阳的功效。临床常用于治疗血虚或肝气不调所致的月经不调，经行腹痛、胁痛、四肢挛痛，及肝阳上亢头痛眩晕等[1]。白芍为中医临床常用药，通过与不同药物配伍，可广泛用于多种疾病的治疗[2]。现代药理研究表明，白芍主要有效成分芍药苷具有镇静镇痛、解痉解热、抗菌抗炎、保肝及增强免疫等作用[3]，与其传统功用十分相吻合。为了进一步研究配伍对其芍药苷煎出量的影响，本实验采用高效液相(HPLC)色谱法测定当归、玫瑰花药物与白芍配伍后其芍药苷煎出量，以期更好指导临床合理配伍用药。
1 仪器与试药
1.1 仪器高效液相色谱仪(安捷伦)，色谱柱XDB C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);真空泵：SHZ-D循环水式真空泵;分析天平(Sartorius CP225D)。
1.2 试药芍药苷标准品，购自中国药品生物制品检定所(批号：110736-20073)。药材白芍、玫瑰花、
当归均购于石家庄乐仁堂药店(经鉴定均符合2005版《中国药典》标准)。甲醇为色谱纯，水为双蒸馏水，其余试剂、试药均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为XDB C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(40∶60);流速1.0 ml/min;检测波长230 nm;柱温25℃;进样量为10 μl;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2 000[4,5]。
2.2 对照品溶液制备精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷标准品10.00 mg置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容，制成浓度为0.10 mg/ml的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备称取白芍10 g左右3份。按配伍比例(白芍∶当归=1∶1;白芍∶玫瑰花=1∶1)称取玫瑰花、当归，与其中两份白芍配伍。4种供试品均加入15倍水浸泡1 h，用武火煮沸后，改用文火，持续加热45 min，倒出药液;再加10倍水，用武火煮沸后，改用文火，持续加热30 min，后合并两次药液，浓缩至100 ml，加入1.5倍95%乙醇醇沉4h后抽滤，留取滤液，回收乙醇，将药液放凉。然后依次用石油醚、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取至无色，萃取液倒入蒸发皿中水浴挥干。残渣用甲醇溶解，置10 ml容量瓶中定容至刻度，从所得溶液中各取1 ml分别置500 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液(1号供试品为白芍，2号供试品为白芍配当归，3号供试品为白芍配玫瑰花)。冷藏，待用。
2.4 阴性对照液制备精密称取当归10.079 g，玫瑰花10.097 g，按供试品制备方法进行制备，从所得溶液中取1 ml置500 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得阴性对照液。冷藏，待用。
2.5 线性关系考察精密量取芍药苷对照品溶液2，3，4，5，6，7，8 ml分别置10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。进样10 μl，在上述色谱条件下测定峰面积。得到对照品不同浓度的色谱峰峰面积，以芍药苷溶液浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=37 560 310.104X+408 791.582，r=0.999 6(n=7)。结果表明芍药苷在0.02～0.08 mg/ml浓度范围内线性关系良好。
2.6 精密度实验精密量取芍药苷对照品溶液(0.05 mg/ml)10 μl，重复进样5次，在上述色谱条件下测定峰面积。结果为RSD=0.7%，小于3%，说明仪器精密度良好。
2.7 稳定性实验精密量取3号供试品溶液10 μl，每隔4 h测定1次，共测定5次，在上述色谱条件下测定峰面积。峰面积的平均值为2 265 471，RSD=1.1%，结果表明样品溶液在16 h内稳定。
2.8 重复性实验
精密称取同一批白芍样品，按供试品溶液制备方法制备5份平行样品，进样10 μl。在上述色谱条件下测定峰面积。由峰面积得出芍药苷浓度，计算芍药苷浓度的RSD值为1.5%，结果表明本方法重复性良好。
2.9 加样回收率实验采用加样回收率测定法，精密量取“2.3”项中1号供试品溶液5 ml，置10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。精密量取1 ml，共9份，每3份1组，每组分别加入对照品溶液0.04 mg/ml)0.8，1，1.2 ml。进样10 μl，在上述色谱条件下测定峰面积，计算回收率。计算公式为：回收率(%)=(测得量-供试品含量)/加入量×100%。回收率都在95%～105%之间，平均回收率为99.51%，RSD值为2.6%，结果表明本方法回收率较高。