多药效学指标评价乌鳖颗粒中黄狗肾提取工艺
作者：陈武,周洪亮1王海丹1刘志辉
【摘要】 目的 采用多药效学指标确定乌鳖颗粒中黄狗肾的提取工艺。方法 比较黄狗肾95%乙醇提取和70%乙醇提取两种工艺对卵巢摘除大鼠雌激素活性以及对幼鼠子宫、卵巢发育的影响。结果 两种提取工艺的提取物均可使卵巢摘除大鼠血清雌二醇水平增高;95%乙醇工艺提取还具有提高大鼠雌激素活性及促进幼鼠子宫、卵巢生长的作用。结论 乌鳖颗粒中黄狗肾饮片应采用95%乙醇提取。
【关键词】 乌鳖颗粒;黄狗肾;提取工艺;多药效学指标评价
Abstract：Objective To define the extraction process of Dog Penis in Wubie Granules by multiple pharmacodynamics indicators. Methods Rat ovaries were removed by operation. The effect of 95% alcohol extraction and 70% alcohol extraction were compared on uterus and ovaries development of immature mice and estrogen activity of rats with operation. Results Products of both processes could raise E2 level in serum of rats with operation, 95% alcohol extraction could also enhance estrogen activity of rats and develop uterus and ovaries of immature mice. Conclusion Dog Penis in Wubie Granules should be extracted by 95% alcohol.
Key words：Wubie Granules;Dog Penis;extraction process;multiple pharmacodynamics index evaluation
乌鳖颗粒来源于江苏省中医院名老中医夏桂成教授临床经验方,由黄狗肾、制何首乌和鳖甲等7味药组成,临床上用于治疗卵巢功能早衰。黄狗肾为犬科动物狗Canis familiaris L.的干燥阴茎和睾丸,具有暖肾、壮阳、益精功效[1]。目前黄狗肾文献报道比较少,物质基础研究薄弱,有效成分尚不明确,为保证制剂疗效,笔者采用多药效学指标评价方法对黄狗肾提取工艺进行探索。
1 实验材料
1.1 动物
雌性SD大鼠,体重120～140 g,由浙江大学实验动物中心提供,动物合格证号：SCXK(浙)2008-0033。ICR小鼠,体重14～18 g,由扬州大学实验动物中心提供,动物合格证号：SCXK(苏) 2007-0001。
1.2 仪器
SP-756PC型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司);LDZ5-2型离心机(北京京立离心机有限公司);r-911全自动放免计数仪(中国科技大学实业总公司);FA1004电子分析天平(上海精科天平厂)。
1.3 药物与试剂
六味地黄丸(河南宛西制药股份有限公司,批号090872)。黄狗肾及方中饮片均购于江苏省医药公司,经鉴定符合相关要求。红四氮唑(TTC,上海试剂三厂,批号961115);四氯乙烯(中国医药集团上海化学试剂公司,批号20010203);无水乙醇(上海久亿化学试剂有限公司,批号20090210)。雌二醇(E2)试剂盒(北京华英生物技术研究所,批号20091128);促卵泡激素(FSH)试剂盒(北京华英生物技术研究所,批号20091128);黄体生成素(LH)试剂盒(北京华英生物技术研究所,批号20091128)。
2 方法与结果
2.1 供试液制备方法
工艺A提取液：按处方比例称取饮片,黄狗肾加10倍量95%乙醇回流提取2次,每次1 h,滤过,药液与药渣备用;枸杞子、茯苓加10倍量水煎煮2次,每次1 h,滤过,合并滤液,浓缩至相对密度为1.20(60 ℃测)的浸膏,备用;黄狗肾药渣与方中其他饮片加10倍量水煎煮2次,每次2 h,滤过,合并滤液,浓缩至相对密度1.15(80 ℃测),加乙醇至含量为60%,静置48 h,抽滤,滤液与黄狗肾液合并回收乙醇至尽,再与枸杞子、茯苓提取液合并即得。
工艺B提取液：按处方比例称取饮片,黄狗肾加10倍量70%乙醇回流提取2次,每次1 h,滤过,药液与药渣备用;其余6味饮片的处理同工艺A。
阳性对照液：取六味地黄丸捣碎,研成粉状,然后加入蒸馏水混溶,即得。
阴性对照液：按处方比例称取饮片(缺黄狗肾),饮片的处理同工艺A。
2.2 统计学方法
数据用—(—用)±s表示,采用t检验,用SPSS11.0统计软件进行统计分析。