HPLC法测定骨痛灵巴布剂中雪上一枝蒿甲素含量
作者：李军红 金日显 赵彬 李曼玲 刘淑芝
【摘要】 ：目的 建立骨痛灵巴布剂中有效成分的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,Kromasil-C18色谱柱,pH 7.3的磷酸盐缓冲溶液-甲醇(28∶72)为流动相,检测波长210 nm,测定骨痛灵巴布剂的有效成分雪上一枝蒿甲素的含量。结果 雪上一枝蒿甲素在0.212 0～4.770 0 μg范围内线性关系良好(r＝0.999 99),平均回收率100.10%, RSD＝2.53%。结论 该方法精密度高,回收率稳定,重复性好,可以用于骨痛灵巴布剂的质量控制。
【关键词】 骨痛灵 巴布剂 雪上一枝蒿甲素 高效液相色谱法
Abstract：Objective To establish a method for the determination of Bullatine A in Gutongling Babu plaster. Method The Bullatine A was determined by HPLC on Kromasil-C18 column, and the mobile phase consisted of phosphate buffered solution (pH 7.3) - methanol (28∶72), the detection wavelength was 210nm. Result A good linear relationship of Bullatine A was showed in the range of 0.212 0～4.770 0 μg (r＝0.999 99), and the average recovery was 100.10%, RSD＝2.53% (n＝6). Conclusion The method is accurate and reliable, and can be used for quality control of Gubitong Babu plaster.
Key words：Gutongling；Babu plaster；Bullatine A；HPLC
骨痛灵由雪上一枝蒿、乳香、没药等药味组成,功能温经散寒、祛风活血、通络止痛,用于治疗腰、颈椎骨质增生,骨性关节炎等症。巴布剂是目前中药经皮给药系统(TTS)研究的热点之一,其基质由水溶性高分子材料制成,具有载药量大、透皮效果好、贴着舒适、对皮肤无刺激等特点,尤其适合于中药制剂。骨痛灵由酊剂改为巴布剂,能够克服剂型的某些不足,延长药物的作用时间,保持传统药物的确切疗效。为控制制剂的质量,本试验以HPLC法测定了骨通灵巴布剂君药中有效成分雪上一枝蒿甲素的含量,方法简便、可靠、重现性好。现报道如下。
1 仪器与试药
美国Waters 1515高效液相色谱仪,2487紫外检测器, Empower色谱工作站。
骨痛灵巴布剂：自制(批号070510、070517、070524)；雪上一枝蒿甲素对照品(中国药品生物制品检定所,批号110895-200303)。甲醇(色谱级,天津四友精细化学品有限公司),其余试剂均为分析纯；水为高纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；检测波长：210 nm；柱温：35 ℃；流速：1 mL/min；流动相：磷酸盐缓冲液(磷酸氢二钠1.97 g,磷酸二氢钾0.22 g,加水溶解并稀释至1 000 mL,用80%磷酸溶液调节pH至7.3)-甲醇(28∶72)[1]。
2.2 供试品溶液的制备
取骨痛灵巴布剂,揭去保护膜,对折后剪碎,置锥形瓶中,加入氨试液15 mL,振摇,使巴布膏均匀、充分的完全吸收氨试液；精密加入氯仿50 mL,称定,水浴回流2.0 h,取下,放至室温,称定,用氯仿补足减失的重量,摇匀,静置；精密吸取氯仿液25 mL,水浴蒸干,残渣加甲醇超声溶解,转移,甲醇定容至10 mL；用0.45 μm微孔滤膜过滤,进样测定。HPLC图谱见图1。
2.3 标准曲线的绘制
取雪上一枝蒿甲素对照品适量,精密称定,甲醇溶解,制成0.106 0 mg/mL的对照品溶液。取对照品溶液分别进样2、4、8、15、20、30、45 μL；以进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,计算回归方程,结果：Y＝704 672X＋31 485,r＝0.999 99,表明雪上一枝蒿甲素在0.212 0～4.770 0 μg之间线性关系良好。
2.4 精密度试验
取对照品溶液连续重复进样6次,每次进样20 μL,记录峰面积,计算平均值,RSD＝0.80%(n＝6)。表明本方法精密度良好。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液分别在0、3、6、9、12、24 h重复进样,每次20 μL,测定峰面积,计算,RSD＝1.48%。表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。