安脉颗粒提取工艺的正交优选

                   作者：安晏,陆兔林,马新飞,殷放宙

【摘要】  目的 对安脉颗粒提取工艺进行研究。方法 采用正交设计试验法,以绿原酸及肉桂酸为指标,选取L9(34)正交表,考察乙醇浓度、乙醇用量、提取次数、提取时间等工艺参数对绿原酸及肉桂酸含量的影响。结果 以饮片投料,加9倍量的70%乙醇,回流提取2次,每次1.0 h为最佳工艺。结论 该工艺稳定可靠,可用于生产。

【关键词】  安脉颗粒；绿原酸；肉桂酸；正交试验；高效液相色谱法

    安脉颗粒是由金银花、玄参、党参、太子参等经提取加工制成的中药复方制剂,具有活血化瘀、养阴通络的功效,临床上用于血栓闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症等。为保证安脉颗粒提取工艺的科学合理,有利于患者服用,本试验以绿原酸、肉桂酸为考察指标,采用正交试验设计法对安脉颗粒醇提取工艺进行研究,得出最佳工艺。

　　1  仪器与试药

    Agilent 1100型高效液相色谱系统(安捷伦科技有限公司)；CP225D微量天平(德国Sartorius)；KQ-500E型医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

    绿原酸(中国药品生物制品检定所,批号110753-200212)；肉桂酸(中国药品生物制品检定所,批号110786-200403)。乙腈、甲醇为色谱纯,其余所有试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  正交试验设计

    按比例称取金银花6 g,玄参6 g,党参6 g,太子参4 g,根据相应的因素水平表(见表1)提取,合并提取液,浓缩成稠膏,取样,测定绿原酸、肉桂酸含量。

　　2.2  绿原酸含量测定

　　2.2.1  色谱条件 

　　Kromasil?-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(12∶88),流速：1.0 mL/min,
检测波长327 nm[1],理论塔板数不低于1 500。表1  提取因素水平表（略）

　　2.2.2  对照品溶液的制备 

　　精密称定绿原酸对照品适量,置棕色量瓶中,加50%甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液,即得(10 ℃以下保存)。

　　2.2.3  供试品溶液的制备 

　　精密吸取醇提样品液2 mL,加蒸馏水稀释至25 mL,离心,取上清液,供测定用。其余50%、60%、70%乙醇回流提取液各取3份,分别精密吸取2 mL,加30%甲醇稀释至25 mL,离心,取上清液,供测定用。

　　2.2.4  供试品的测定 

　　精密量取上述对照品和各供试品溶液,注入液相色谱仪,测定并计算含量。色谱图见图1。

　　2.3  肉桂酸含量测定

　　2.3.1  色谱条件 

　　Kromasil?-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,甲醇-0.1%磷酸溶液(54∶46)为流动相,检测波长为278 nm[2],理论塔板数不低于1 500。

　　2.3.2  对照品溶液的制备 

　　精密称定肉桂酸对照品适量,置量瓶中,加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液,摇匀,即得。

　　2.3.3  供试品溶液的制备 

　　精密吸取水提样品液2 mL,加蒸馏水稀释至25 mL,离心,取上清液,供测定用。其余50%、60%、70%乙醇回流提取液各取3份,分别精密吸取10 mL,加50%甲醇稀释至25 mL,离心,取上清液,供测定用。