多指标综合评分法优化更年康颗粒醇提工艺

【摘要】  ：目的 优化更年康颗粒的醇提工艺。方法 采用正交试验设计,以芍药苷、黄芪甲苷含量为评定指标,用多指标综合评分法进行数据处理,优化提取条件。结果 更年康颗粒优化醇提工艺为18倍量70%乙醇,分3次回流提取,每次1.5 h。结论 该提取工艺合理,有效成分提取效率高。

【关键词】  更年康颗粒　芍药苷　黄芪甲苷　正交实验　综合评分法

　    Abstract：Objective To optimize the extraction technology for Gengniankang Granules. Methods An orthogonal test was adopted in the study. The contents of Paeoniflorin and Astragaloside Ⅳ were used as indices of appraisal. Data processing was carried out with the multiple guidelines grading method for optimizing the extraction condition. Results The optimized extraction technology for Gengniankang Granules was shown to be：eighteen fold volume of 70% alcohol should be added to 1 volume of the granules for 3 successive reflux extractions with 1.5 h of each. Conclusion The optimized extraction technology was rational and the extraction rate of the active components was high.

　　Key words：Gengniankang Granules；Paeoniflorin；Astragaloside Ⅳ；orthogonal test；grading methods

  　  更年康颗粒是在《景岳全书》归肾丸的基础上,根据辨证施治原理并结合临床实践筛选出来的,由白芍、枸杞子、熟地黄、黄芪、合欢皮、淫羊藿、钩藤等9味中药组成,具有滋肾养阴、平肝宁心的功效。主要用于治疗妇女更年期潮热汗出、心烦失眠等症状。为减少药物用量及更好地发挥其功效,通过查阅文献,将方中的白芍、黄芪、合欢皮、钩藤4味药物进行乙醇提取,其余药物进行水煎煮提取。本试验就上述4味药物的醇提工艺,应用正交试验法,以芍药苷、黄芪甲苷含量为指标,采用综合评分法进行优选。

　　1  仪器与试药

  　  LC-10ADvp型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；SPD-6AV紫外检测器(日本岛津公司)；美国Alltech公司500型蒸发光散射检测器；HW-2000色谱工作站；电子天平(Mettler Toledo AG285)；KQ-500E型医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。
   
　　芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110736- 200526)；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号110781-200512)；中药材购自南京市药材公司,经南京中医药大学药学院生药教研室鉴定为符合2005版《中华人民共和国药典》规定药材。甲醇为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯,均购自上海化学试剂有限公司；水为重蒸水(自制)。

　　2  方法与结果

　　2.1  正交设计
  
　　方中白芍为君药,其活性成分为芍药苷,可溶于醇类；黄芪、合欢皮主要成分为皂苷和多糖类物质,且这两部分均为活性成分,工艺中采用醇提取,可兼顾两部分成分；钩藤主要活性成分为各种吲哚类生物碱,主要有钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛因碱等,其在乙醇中有较好的溶解性,为充分提高生物碱的利用率,采用醇回流提取。故根据方中这4味药的主要化学成分的理化性质,以乙醇为提取溶媒,采用L9(34)正交表进行正交设计,对乙醇的浓度(B)、用量(A)、提取次数(C)、提取时间(D),用4因素3水平进行考察,以芍药苷、黄芪甲苷含量为考察指标,进行提取工艺最佳参数的确定。其提取工艺因素水平设计见表1。按处方配比取处方药材9份,每份45 g,按照因素水平表操作,加入乙醇,加热回流,过滤后将所得的滤液减压浓缩成稠膏。表1  因素水平表（略）

　　2.2  考察指标的测定

　　2.2.1  HPLC法测定芍药苷含量 

　　色谱条件：采用依利特Hypersil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：1 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：30 ℃。

   　 线性关系考察：精密吸取0.601 mg/mL芍药苷对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL,分别置于5 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,使浓度分别为0.060 1、0.120 2、0.180 3、0.240 4、0.300 5 mg/mL。分别吸取上述各对照品溶液20 μL,进样,按上述色谱条件测定峰面积值,以峰面积均值(Y )为纵坐标,进样浓度(X )为横坐标,绘制标准曲线。得回归方程：Y＝6 223 541.78X＋38 695.056,r＝0.999 8(n＝5)。结果表明,芍药苷在0.060 1～0.300 5 mg/mL范围内呈良好的线性关系。
   
　　含量测定：取按各提取工艺制备的稠膏约0.2 g,精密称定,置离心管中,精密加入稀乙醇20 mL,称定重量,超声处理1 h,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得芍药苷供试品溶液。吸取20 μL,注入液相色谱仪,每个样品平行进样2次,以外标两点法计算,测定各样品中的芍药苷含量。结果见表2。