高效液相色谱法测定荜茇止痛酊中胡椒碱的含量

　　2.5  阴性液干扰试验
   
　　精密吸取供试品溶液、阴性液和对照品溶液各10 μL注入色谱仪中,由色谱图可知,在与对照品色谱峰保留时间相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰出现；而阴性液在此峰位无吸收,对本品中胡椒碱的含量测定无干扰,色谱图见图1。

　　2.6  线性关系的考察
   
　　精密吸取胡椒碱对照品(10.38 mg→50 mL)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分别置25 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取10 μL,注入高效液相色谱仪,记录峰面积。以对照品的含量对峰面积值作图,得到一个通过原点的直线,并绘制标准曲线。结果表明,胡椒碱在8.3～41.5 mg/L范围内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为：A＝3 413 186ρ－7 467.7,r＝0.999 8。

　　2.7  精密度试验

    精密吸取同一供试品溶液(批号041212),重复进样5次,求得RSD＝0.93%。

　　2.8  稳定性试验

    精密吸取同一供试品溶液(批号041212),分别于配制后0、2、4、8、16、24 h测定色谱峰面积,计算RSD为1.2%,结果表明,其在24 h内基本稳定。

　　2.9  回收率试验

    精密吸取已知含量的同一批号(批号041212)样品0.5 mL,分别精密加入胡椒碱对照品乙醇溶液,依法测定,结果平均回收率为99.97%,RSD＝1.8%(n＝6)。见表1。 表1  加样回收率试验结果（略）

　　2.10  样品中胡椒碱含量测定
   
　　取3批荜茇止痛酊样品,照“2.4”项测定,结果见表2。表2  样品含量测定结果(略)

　　3  讨论

    本实验采用高效液相色谱法内标法和外标法2种方法进行荜茇药材中胡椒碱含量的对比试验,结果显示,2种方法测定结果基本相同。2005年版《中华人民共和国药典》采用内标法测定含量,结果准确,但鉴于中药复方制剂成分复杂,采用内标法时分离度难以满足要求,因此,本实验研究采用外标法更为实际、可行。

    由于荜茇止痛酊所含成分复杂,给含量测定带来一定的困难。我们在样品前处理采用无水乙醇稀释、冰箱中静置除去杂质的方法,使样品得到净化,可满足含量测定的要求,且重现性好。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.163.

　　[2] 陶淑娟,王桂燕,毕开顺.HPLC法测定蒙药那如-3丸中胡椒碱的含量[J].沈阳药科大学学报,2004,21(1)：35－37.

　　[3] 权丽辉,赵淑平,徐丽珍.RP-HPLC测定止痛胶囊中胡椒碱的含量[J].中国中药杂志,2005,30(3)：235,240.

　　[4] 戴 涌,孙文基.成药泻宝中胡椒碱的HPLC测定[J].中成药,1995, 17(3)：12－13.