HPLC法测定复方灵贞胶囊中齐墩果酸的含量
作者：钱一帆,尹慧晶,狄斌,濮存海
【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定复方灵贞胶囊中齐墩果酸含量的方法。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为甲醇-水-乙酸-三乙胺(88∶12∶0.04∶0.02)；流速为1 mL/min；检测波长为220 nm。结果 在38.88～972.0 μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9992),平均回收率为100.81%,RSD=0.54%。结论 本方法简单、灵敏,结果准确、快速,可用于复方灵贞胶囊的质量控制。
【关键词】 复方灵贞胶囊；齐墩果酸；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish a method for determination the content of Oleanolic acid in compound Lingzhen capsules by HPLC. Methods C18 column (Lichrospher 6.0 mm×150 mm, 5 μm) was applied with CH3OH-H2O-CH3COOH-(C2H5)3N (88∶12∶0.04∶0.02) as its moble phase (flow rate：1 mL/min). Detection wavelength was 220 nm. Results The linearity of Oleanolic acid was in the range of 38.88～972.0 μg/mL, r=0.999 2. Average recovery of Oleanolic acid was 100.81% with RSD=0.54%. Conclusion This method was simple and sensitive, the results were accurate and quick. It is available for the quality control of Compound Lingzhen Capsules.
Key words：Compound Lingzhen Capsules；Oleanolic acid；HPLC；content determination
复方灵贞胶囊由灵芝(Ganoderma)孢子粉和女贞子(Fructus Ligustri Lucidi)组成,具有益气养阴、扶正固本的功效。主要用于气阴两虚证肺癌、胃癌、肝癌患者的辅助治疗。女贞子中所含齐墩果酸为该药的有效成分。2005版《中华人民共和国药典》[1]采用薄层色谱扫描法对女贞子进行质量控制。采用HPLC法测定齐墩果酸含量也多有报道[2-6],但样品中的齐墩果酸和熊果酸往往难以分离。本试验参照文献报道,对色谱条件进行摸索选择,建立了采用HPLC法测定复方灵贞胶囊中齐墩果酸含量的方法,并进行了方法学研究。
1 仪器与试药
日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪,SPD-10A紫外检测器,N2000色谱工作站。
甲醇为色谱纯,乙酸、乙醇、三乙胺均为分析纯；水为蒸馏水。齐墩果酸对照品(供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所,批号110709-200304；复方灵贞胶囊供试品,南京中科生化技术有限公司生产,批号分别为20030501、20030502、20030503。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为汉邦Lichrospher C18(6.0 mm×150 mm,5 μm)；以甲醇-水-乙酸-三乙胺(88∶12∶0.04∶0.02)为流动相；流速为1 mL/min；检测波长220 nm；进样20 μL；柱温为室温。齐墩果酸峰与熊果酸峰分离度大于1.5。见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取在60 ℃减压干燥4 h的齐墩果酸对照品适量,加甲醇制成每1 mL约含200 μg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品10 g,研细,取细粉约150 mg,精密称定,置10 mL容量瓶中,加甲醇约8 mL,超声处理20 min,放冷至室温,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备
按处方称取缺女贞子的其它各药味和辅料适量,依制剂工艺制成不含女贞子的阴性对照品,按照“2.3”项下方法依法制成阴性对照品溶液。
2.5 专属性试验
精密吸取阴性对照溶液20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。另按照“2.2”项下的方法制备对照品溶液,吸取20 μL,注入液相色谱仪进行测定。结果表明,此种方法对本品齐墩果酸含量的测定具有专属性,并且无干扰。