康媛颗粒质量标准研究

【摘要】  目的 建立康媛颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法对处方中黄芪、白芍、枸杞子和干草进行鉴别；用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷的含量,采用AichromBond-AQ-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相：水-乙腈(85∶15),检测波长为230 nm,柱温30 ℃,流速1 mL/min。结果 薄层色谱专属性强；芍药苷的线性范围为0.0545～0.545 μg,r＝0.999 5,平均加样回收率为97.90%,RSD＝1.06%(n＝6)。结论 该方法简便、准确,重现性好,可作为康媛颗粒的质量控制标准。

【关键词】  康媛颗粒；芍药苷；高效液相色谱法；薄层色谱法；质量标准

    Abstract：Objective To establish the quality standard for Kangyuan Granula. Methods Radix Astragali, Radix Paeoniae Alba, Fructus Lycii and Radix et Rhizoma Glycyrrhizae in this prescription were identified by TLC. The content of the Paeoniflorin was determined by HPLC. The column of AichromBond-AQ-C18 (4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used, the mobile phase was Water-Acetonitrile (85∶15), at the flow of 1.0 mL/min, the column temperature of 30 ℃, and peaks were detected at 230 nm. Results The characteristic of identification by TLC was distinct and highly specific. The linear range of Paeoniflorin was 0.0545～0.545 μg, r＝0.999 5, the average recovery was 97.90%, RSD＝1.06% (n＝6). Conclusion The method was easy to operate with accurate result and good reproducibility. It can be used effectively for the quality control of this preparation.
   
　　Key words：Kangyuan Granula；Paeoniflorin；HPLC；TLC；quality standard
 
    康媛颗粒是本院新研制的中药6类新药,由黄芪、白芍、当归、枸杞子、茯苓、续断、柴胡、香附、白术、陈皮、甘草等组成,具有疏肝解郁、理气止痛、养血调经的功效,适用于经前期紧张综合征及原发性痛经,经前期乳房胀痛,经来小腹疼痛。为了控制该制剂的质量,笔者对黄芪、白芍、枸杞子和甘草进行了薄层色谱鉴别,同时采用高效液相色谱法测定了制剂中芍药苷的含量,建立了可靠、准确、专属性强的质量控制方法。

　　1  仪器与材料
   
　　Waters-515高效液相色谱仪、2487紫外检测器、Empower色谱工作站。药材购于江苏省药材公司,由南京中医药大学王春根教授进行品种和质量鉴定。芍药苷(批号0736-200219)、黄芪甲苷(批号0781-200210)、阿魏酸(批号0773-9910)对照品及当归、陈皮、甘草、枸杞子和香附对照药材均购自中国药品生物制品检定所。康媛颗粒3批产品由江苏省某药业有限公司生产并提供(批号分别为060101、060201、060301)。所有试剂均为色谱纯或分析纯。

　　2  定性鉴别

　　2.1  黄芪的薄层色谱鉴别
   
　　取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。取本品适量,研细,称取5 g,加水50 mL,超声处理30 min,滤过,滤液用水饱和的正丁醇提取2次,每次20 mL,合并正丁醇液,再用氨试液提取2次,每次20 mL,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5 mL使溶解,作为供试品溶液。取除黄芪以外的其它药材按处方比例制得的阴性样品5 g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。吸取上述3种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(10∶10∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。

　　2.2  白芍的薄层色谱鉴别
   
　　取芍药苷对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。取本品适量,研细,称取5 g,加乙醇60 mL,超声处理30 min,滤过,滤液浓缩至干,残渣加水20 mL使溶解,用乙醚提取2次,每次20 mL,弃去乙醚液,再用水饱和的正丁醇提取3次,每次20 mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。取除白芍以外的其它药材按处方比例制得的阴性样品5 g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。吸取上述3种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(5∶40∶15∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛浓硫酸溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。

　　2.3  甘草的薄层色谱鉴别[1]
   
　　取甘草对照药材2 g,加乙醇20 mL,按“2.2”项下方法制得对照药材溶液。用“2.2”项下的供试品溶液,作为供试品溶液。取除甘草以外的其它药材按处方比例制得的阴性样品5 g,按“2.2”项下方法制得阴性对照液。吸取上述3种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(40∶10∶1)的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。

　　2.4  枸杞子的薄层色谱鉴别[2]
   
　　取枸杞子对照药材1 g,加水35 mL,加热煮沸15 min,放冷,滤过,滤液用乙酸乙酯15 mL提取1次,弃去水液,乙酸乙酯液浓缩至约1 mL,作为对照药材溶液。取本品5 g,用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。取除枸杞子以外的其它药材按处方比例制得的阴性样品5 g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。吸取上述3种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(3∶2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,而阴性对照液无此斑点。

　　3  含量测定[3]

　　3.1  色谱条件
   
　　AichromBond-AQ-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为水-乙腈(85∶15),流速1 mL/min,检测波长为230 nm,柱温30 ℃,进样量10 μL。

　　3.2  对照品溶液的制备
  
　　精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的芍药苷对照品,加甲醇制成每1 mL含0.545 mg的溶液,摇匀,作为母液。精密量取对照品溶液5 mL,置50 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成0.054 5 mg/mL芍药苷溶液,分别精密吸取此对照品溶液1、3、5、7、10 mL置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制成5.45、16.35、27.25、38.15、54.5 μg/mL的系列溶液。

　　3.3  供试品溶液的制备
   
　　取本品细粉约2.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加乙醚20 mL,超声处理10 min,滤过,弃去乙醚液,残渣挥去乙醚,加水饱和的正丁醇25 mL,密塞,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用水饱和正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。

　　3.4  系统适应性考察
   
　　分别吸取芍药苷对照液和各供试品溶液10 μL,注入液相色谱仪,理论板数以芍药苷峰计,不低于2 000,此时,芍药苷峰与其它组分峰基线分离,分离度>1.5,保留时间约为10.5 min。

　　3.5  线性关系的考察
   
　　精密吸取5个不同浓度的对照品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,各进2针,以进样量C(μg)对芍药苷平均峰面积A进行回归处理,得回归方程C＝3×10-6A＋0.011 7,r＝0.999 5,结果表明,指标成分进样量在0.054 5～0.545 μg之间线性关系较好。

　　3.6  精密度试验
   
　　精密吸取浓度为38.15 μg/mL的对照品溶液10 μL,连续进样5次,结果芍药苷峰面积值的RSD＝0.62%,表明仪器的精密度良好。

　　3.7  稳定性试验
   
　　精密吸取批号为060101的供试品溶液10 μL,每间隔2 h进一针,连续考察10 h,结果芍药苷峰面积值的RSD＝1.79%,表明指标成分在10 h内基本稳定。

　　3.8  专属性试验
   
　　取除白芍以外的其它药材,按处方比例制得的阴性样品2.5 g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。在与样品测定完全相同的条件下,精密吸取白芍阴性对照液10 μL,注入液相色谱仪,结果阴性无干扰,说明在康媛颗粒中,芍药苷的专属性较强。见图1。

　　3.9  重复性试验

    取批号为060201的康媛颗粒约2.5 g,共6份,精密称定,按样品测定项下的方法测定,测得样品中指标成分芍药苷的含量,RSD＝1.55%,表明重复性良好。

　　3.10  加样回收率试验

　　取批号为060301的康媛颗粒约1.25 g,共6份,精密称定,分别置三角烧瓶中,各精密加入浓度为54.5 μg/mL的对照液6 mL,用与“3.3”项下方法制得供试品溶液。吸取供试品溶液10 μL注入液相色谱仪中,采用随行标准,外标二点法定量,结果见表1。表1  加样回收率试验结果(略)

　　3.11  样品测定

　　取3个批号的康媛颗粒约2.5 g,每批2份,精密称定,分别按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。按上述色谱条件,分别吸取10 μL注入液相色谱仪,采用随行标准,外标二点法定量,结果见表2。表2  康媛颗粒样品含量测定结果(略)
 
　　由实验结果可知,仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重现性和加样回收率等均较好,符合定量要求。根据测定结果,暂定每1 g康媛颗粒中含白芍以芍药苷(C23H28O11)计,不得少于0.20 mg(取3批平均含量的80%为其下限)。

　　4  小结
   
　　本试验建立的黄芪、白芍、陈皮、枸杞子、甘草鉴别专属性强,重现性好,操作简便。而香附、当归的鉴别,因阴性有干扰,专属性不强,故未纳入质量标准中。
   
　　本试验对芍药苷含量测定方法进行了系统的研究,所建立的方法简便、系统适用性、仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重复性和加样回收率等均较好,且专属性较强,符合定量要求。
   
　　本试验建立的质量标准可用于该制剂的质量控制。

【参考文献】
  　　[1] 夏厚林,盛 燕.复方肾茶颗粒质量标准研究[J].中成药,2005,7 (10)：1143.

　　[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.174.

　　[3] 曾惠芳,黄鸣清.调经止血颗粒的质量标准研究[J].中药新药与临床药理,2005,16(5)：356.