HPLC法测定清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量

来源:岁月联盟 作者:张莉,缪建国 时间:2015-06-05

【摘要】  目的 建立清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量测定方法。方法 采用HPLC法,色谱柱为UltimateXB-C18 (5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1),流速为1 mL/min,柱温为40 ℃,检测波长为192 nm。结果 猪去氧胆酸在0.201 35~1.006 75 mg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 6,平均加样回收率为98.25%,RSD=1.26%。结论 方法准确、可靠,重复性好,可用于清开灵注射液的质量控制。

【关键词】  高效液相色谱法;清开灵注射液;猪去氧胆酸

    Abstract:Objective To establish a method for content determination of hyodeoxycholic acid in Qingkailing Injection. Methods An UltimateXB-C18 column (5 μm, 250 mm×4.6 mm) was used with a mobile phase of acetonitril-water-phosphoric acid (35∶65∶0.1). The flow rate was 1 mL/min. The temperature of the column was 40 ℃. The detection wavelength was 192 nm. Results There was a good linear relationship between the concentration of hyodeoxycholic acid and absorption area value in range of 0.201 35~1.006 75 mg/mL, r=0.999 6. The average recovery was 98.25% with RSD=1.26%. Conclusion This method was accurate, credible and repeatable which can be used to control the quality of Qingkailing Injection.
   
  Key words:HPLC;Qingkailing Injection;hyodeoxycholic acid
 
    清开灵为安宫牛黄丸改良的复方注射液,具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍之功,用于热病神昏、中风偏瘫、神志不清,亦可用于急慢性肝炎、乙型肝炎、上呼吸道感染、肺炎、高烧以及脑血栓形成、脑出血见上述证候者。其原方中牛黄具有镇静开窍的作用,主要成分为胆酸和猪去氧胆酸,二者具有与牛黄相似的药效活性[1]。清开灵注射液已收录于2005版《中华人民共和国药典》(一部),其中含量测定包含了胆酸的测定方法[2]。由于胆酸和猪去氧胆酸均为清开灵注射液的活性成分,且结构相似,故而研究了同时测定胆酸和猪去氧胆酸的含量的方法,结果较好。

  1  仪器与试药
   
  Waters 2695高效液相色谱仪。胆酸对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号10078-0013),猪去氧胆酸对照品(Sigma,纯度98%);清开灵注射液(市售样品3批, 10 mL/支,吉林省集安益盛药业股份有限公司生产)。乙腈为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯。

  2  方法与结果

  2.1  色谱条件 

  参考2005版《中华人民共和国药典》(一部)清开灵注射液中胆酸含量测定的色谱条件[2]。经比较色谱峰分离情况以及分离度,确定的色谱条件为色谱柱UltimateXB-C18 (5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1),流速为1 mL/min,柱温为40 ℃,检测波长为192 nm。

  2.2  溶液制备

  2.2.1  对照品溶液的制备 
  
  精密称取猪去氧胆酸对照品适量,加60%乙腈制成每1 mL含2.013 5 mg的溶液,作为对照品溶液。

  2.2.2  供试品溶液的制备 

  精密量取本品10 mL,加稀盐酸0.5 mL,用醋酸乙酯提取4次(20、20、15、15 mL),合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加60%乙腈适量使溶解,并转移至25 mL量瓶中,用60%乙腈稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。

  2.2.3  阴性溶液的制备 

  取缺胆酸、猪去氧胆酸的阴性制剂,按供试液溶液制备方法制备,即得。

  2.3  专属性试验
   
  分别吸取猪去氧胆酸对照品溶液、供试品溶液与阴性溶液,按上述色谱条件进行检测,结果供试品、猪去氧胆酸对照品在相应时间出现猪去氧胆酸特征吸收峰,阴性溶液无干扰吸收峰。结果见图1。

  2.4  标准曲线及线性范围
   
  分别精密吸取猪去氧胆酸对照品溶液1、2、3、4、5 mL,加60%乙腈稀释至10 mL,在上述色谱条件下,进样10 μL,测定峰面积值。以峰面积平均值和对照品溶液浓度进行回归处理,回归方程为:A=5.755 10×105C-2.114 200×103,r=0.999 6;猪去氧胆酸在0.201 35~1.006 75 mg/mL浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。

  2.5  最低检测限
   
  取0.201 35 mg/mL的对照品溶液用60%乙腈稀释1倍,得0.101 675 mg/mL的溶液,取10 μL进样测定,S/N=3,故最低检测限为1 μg。

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