疣清颗粒质量标准研究
【摘要】 目的 建立疣清颗粒质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对制剂中香附、白芍进行定性鉴别；对组方中有效成分黄芪甲苷用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法(RP-HPLC-ELSD)进行定量分析。结果 薄层色谱中斑点清晰,易于识别；RP-HPLC-ELSD法精密度、重现性良好,黄芪甲苷在1.032～5.16 μg范围内具有较好的线性关系,平均加样回收率为99.051 6%,RSD＝1.05%。结论 在本研究基础上制定的质量标准可以控制本品的内在质量,方法是可行的。
【关键词】 疣清颗粒；黄芪甲苷；反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法；薄层色谱法
Abstract：Objective To establish the quality control method for Youqing Granules. Methods Qualitation discrimination of Rhizoma Cyperi and Raidix Paeoniae in this formula was identified by TLC. Quantitive analysis of Astragaloside A which is the effective element of the formula was adopted by RP-HPLC-ELSD. Result The specks in TLC were clear and easy to discriminate. The precision and reproducibility of the RP-HPLC-ELSD method were fine. In 1.032～5.16 μg, the content of Astragaloside A had good linear relationship. The average recovery rate of sample was 99.051 6%, and RSD＝1.05%. Conclusion The quality standard established on this study can control the quality of the products, the method is viable.
Key word：Youqing Granules；Astragaloside A；RP-HPLC-ELSD；TLC
疣清颗粒由黄芪、白芍、香附、薏苡仁等药物组成,具有清热解毒、托毒排脓、敛疮生肌功效,主要用于治疗尖锐湿疣等皮肤病。本试验采用薄层色谱法对方中黄芪、香附、白芍进行薄层鉴别。黄芪是方中主药,因此,选定黄芪甲苷为该制剂的含量测定项目,采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法(RP-HPLC-ELSD)进行检测,以制定该制剂的质量控制标准。
1 仪器、试剂与药品
日本岛津HW-2000高效液相色谱仪(日本岛津公司)；KQ-500E型医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)；TD5A低速台式离心机(长沙湘仪离心机有限公司)；AY220电子天平(岛津)；Lichropher C18(5 μm,4.6 mm ID×15 cm)色谱柱(淮阴汉邦科技有限公司；硅胶G(青岛海洋化工厂)。
黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号为110781-200511)。黄芪、白芍、薏苡仁、香附等药材购自辽宁省药材公司,经鉴定,符合2005年版《中华人民共和国药典》(一部)有关标准。疣清颗粒样品自制,批号为060611,060613, 060615。甲醇为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 白芍 [1]
取本品3 g,加乙醇10 mL,超声处理10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取白芍对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。再取除白芍外的其它处方量药材,按制备工艺制成缺白芍的阴性样品,取适量阴性样品同法制成缺白芍的阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,分别吸取上述3种溶液10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-甲醇-丙酮(8∶4∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。
2.1.2 香附[2]
取本品4.6 g,加温水(50 ℃)30 mL,超声处理10 min,水溶液用乙醚提取2次,每次30 mL,合并乙醚液,挥去乙醚,残渣加醋酸乙酯1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取香附对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。另按处方及工艺分别制备不含香附的阴性样品,同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-甲苯(3∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2,4-二硝基苯肼乙醇试液,放置1 h,斑点渐变为橙红色,而阴性对照液在相应位置上无此斑点。
2.2 黄芪甲苷的含量测定
2.2.1 色谱条件[3]
色谱柱为Lichrospher C18(5 μm,4.6 mm ID×15 cm,淮阴汉邦科技有限公司)；流动相：甲醇-水(80∶20)；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃。ELSD检测温度：92 ℃；气体流量2.24 L/min。
2.2.2 对照品溶液的制备和线性关系的考察
精密称取黄芪甲苷对照品5.16 mg置于10 mL容量瓶中并定容至刻度,得到浓度为0.516 mg/mL的对照品溶液。分别取对照品溶液,用甲醇稀释成0.103 2、0.206 4、0.309 6、0.412 8、0.516 mg/mL黄芪甲苷溶液,按上述色谱条件测定。以黄芪甲苷的进样量常用对数为纵坐标,黄芪甲苷的峰面积常用对数为横坐标,回归得标准曲线：logA＝0.779 133logC＋7.380 524,r＝0.999 973。结果表明,黄芪甲苷的进样量在1.032～5.16 μg范围内,与其峰面积有良好的线性关系。