双根清脑颗粒质量标准研究

　　3  葛根素的含量测定

　　3.1  色谱条件

    色谱柱：Lichrospher C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速1.0 mL/min；检测波长：250 nm；柱温：30 ℃；理论塔板数按葛根素计应不低于2 000；进样量4 μL。

　　3.2  对照品溶液的制备

    精密称取葛根素对照品4.05 mg,置10 mL量瓶中,用30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密移取2 mL,置10 mL量瓶中,加30%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得81.0 μg/mL的对照品溶液。

　　3.3  供试品溶液的制备

    取双根清脑颗粒,研细,取0.45 g,精密称定,加甲醇超声处理30 min,定容至25 mL,取上清液,经0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。

　　3.4  空白试验
   
　　取缺葛根的阴性制剂,按供试品溶液制备方法制成葛根阴性对照溶液。将葛根素对照品溶液、供试品溶液和葛根阴性对照溶液,分别注入液相色谱仪中,进行测定,得到色谱扫描图(见图1),显示供试品与葛根素在相应位置有相似的峰,而阴性对照则无,说明其它药味不干扰葛根素的检测。

　　3.5  线性关系考察
   
　　取3.2项下的对照品溶液。分别精密吸取0.5、0.25、0.126、0.064 mL置1 mL容量瓶中,加30%乙醇至刻度,摇匀,进样测定。以对照品进样浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,则回归方程为Y=13.124     93X-7.027 8,相关系数r=0.999 7。表明进样量在5.184～40.50 μg/mL范围内线性关系良好。

　　3.6  精密度试验

    对同一葛根素对照品溶液按上述色谱条件连续测定5次,结果RSD为0.2%。试验表明本法精密度较好。

　　3.7  稳定性试验

    对同一供试品溶液,在12 h内每隔一定时间测定1次,共测定5次,结果5次测定的平均含量为29.8 mg/g,RSD为0.7%。

　　3.8  重复性试验

    对同一批样品,按上述色谱条件平行测定5份。5份测定结果的平均值为30.0 mg/g,RSD为1.5%。表明本法的重复性较好。

　　3.9  加样回收率测定
   
　　精密称取已知含量的双根清脑颗粒3份,每份约0.45 g,分别精密添加葛根素对照品适量,按3.3项下方法制备供试品溶液,进样测定,计算回收率。结果平均回收率为99.93%,RSD= 1.81%,符合定量分析的要求,见表1。表1  回收率测定结果（略）

　　3.10  样品测定

    取3批样品,根据3.3项下方法制备供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各4 μL,注入高效液相色谱仪,测定,结果见表2。表2  样品测定结果(略)

　　4  讨论

　　4.1  薏苡仁薄层鉴别的展开系统

    曾采用石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-醋酸(10∶3∶0.1)为展开剂,置紫外光灯(365 nm)下检视,阴性与阳性在同一位置显色,有干扰。后改用石油醚(60～90 ℃)-乙醚-乙酸(15∶1∶0.01)为展开剂,斑点清晰,阴性无干扰。

　　4.2  板蓝根提取溶剂的选择
   
　　在薄层鉴别板蓝根中的靛玉红时,曾用乙醇超声提取,但提取效率较低,采用氯仿提取效果好,所得靛玉红含量较高,薄层斑点明显,阴性无干扰。