薏苡非种仁部位甲醇提取物的指纹图谱研究
作者：李厚聪，袁玮，李莹，刘圆
【摘要】 目的建立薏苡药材茎中甲醇部位的RP-HPLC指纹图谱的研究方法。方法采用Kromasil C18色谱柱（Dikma 公司，4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇-水为流动相梯度洗脱，流速1 ml·min-1，柱温30 ℃，检测波长263 nm。结果用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离较好，达到指纹图谱要求。10个产地薏苡药材共标定了12个共有峰。结论该方法简便、实用、可靠,可以作为评价薏苡药材质量的基础。
【关键词】 薏苡； 高效液相色谱； 指纹图谱
Abstract：ObjectiveTo establish reversed - phase high performance liquid chromatography(RP - HPLC) for determination of fingerprint of C. lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf. Methods The sample was separated on a Kromasil C18 (4.6 mm ×250 mm ,5 μm) column with gradient elution. The mobile phase consisted of methol and water. The flow rate was 1.0 ml·min- 1 ; the temperature of column was at 30 ℃; UV detection wavelength was at 263 nm, and recording time was 75 min. ResultsHPLC chromatogram by Fingerprint of C. lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf was obtained. 12 common peaks in the HPLC profile were found in C. lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf in 10 different growing areas. ConclusionThis method is simple , practicable and reliable and can be used for the quality control of C. lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf .
Key words：C. lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf ; RP-HPLC； Fingerprint
薏苡为禾本科薏苡属植物薏苡C. lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf和川谷C. lacryma-jobi L.的干燥全草、果实和种仁。
《中国药典》从1963年版开始收载禾本科植物薏苡C.lacryma-jobi L.var.mayuen (Roman.) Stapf的干燥成熟种仁；2005年版记载薏苡仁粉末的鉴别、油脂类成分的薄层鉴别和甘油三油酸酯的含量测定项；功效为健脾渗湿、除痹止泻、清热排脓；用于水肿、脚气、小便不利、湿痹拘挛、脾虚泄泻、肺痈、肠痈；扁平疣的治疗［1］。薏苡根收载于上海市中药材标准1994年版中，有清热、利尿和驱虫作用［2］。
薏苡的根、茎、叶、果实、种仁等药用部位在中国的蒙古族、藏族、苗族、彝族、侗族、佤族、傈僳族、傣族、壮族、毛难族、瑶族、哈尼族、景颇族、水族、基诺族等民族中均有大量使用［3］，而现有文献中关于薏苡根、茎、叶的研究涉及较少。
有研究报道［4］表明薏苡抗肿瘤活性成分主要集中在甲醇部位，甲醇部位化学成分复杂，为更好地控制薏苡药材的质量，本文采用HPLC-DAD法建立了薏苡非种仁部位的指纹图谱，为薏苡非种仁部位（根、茎和叶）药材的质量控制提供新方法，为正确、科学和合理开发利用等方面提供一定的实验依据。
1 材料与仪器
1.1 试剂与材料甲醇为色谱纯（美国迪马公司）；水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。实验所用药材，室温阴干，经刘圆教授、戴斌、彭朝忠副教授鉴定。来源见表1。表1 薏苡药材来源（略）
1.2 仪器Waters2695 高效液相色谱仪；Waters2996 DAD检测器（美国Waters公司）；Empower Pro色谱工作站；KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLER AE240电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版；DPS2000 数据处理系统。
2 方法
2.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水梯度洗脱，甲醇为A相，水为B相，梯度洗脱表见表2；流速1 ml·min-1；柱温30 ℃；检测波长263 nm；分析时间75 min。表2 梯度洗脱（略）
2.2 样品溶液的制备 称取薏苡药材粉末约1 g，过60目筛，精密称定，准确加入10 ml的甲醇，称重，超声提取30 min，放冷加甲醇补足损失重量摇匀，过滤，滤液蒸干，用10 ml甲醇溶解并定容，吸取滤液，过微孔滤膜(0.45 μm)，取续滤液备用。
2.3 方法学考察
2.3.1 精密度实验取10号供试品溶液，连续进样5次，测定12个主要色谱峰(特征峰的保留时间和峰面积比值)，结果表明各主要色谱峰的相对保留时间RSD＜2 %，峰面积RSD＜10 %，表明精密度良好。
2.3.2 稳定性实验取10号供试品溶液，分别于2，8，16，24，48，72 h检测指纹图谱，记录各主要色谱峰保留时间及峰面积比值。结果表明各色谱峰的相对保留时间RSD＜2 %，在12个共有峰中有9个峰的峰面积RSD接近或超过10%，通过分析数据发现供试品溶液在48 h内稳定。
2.3.3 重复性实验取五块石薏苡药材根茎粉末5份，每份1.0 g，精密秤定，按“2.2”项下样品溶液的制备方法制备供试液，检测指纹图谱，记录12个主要色谱峰的保留时间和峰面积比值，结果表明各主要色谱峰的相对保留时间RSD均在1 %以内，说明重复性良好。