苦豆子总碱及4种单体生物碱对幽门螺杆菌的体外抑菌作用研究

　　3  结果

　　3.1  Hp的分离培养及鉴定培养3～5 d后，肉眼观察到培养基表面的菌落为无色半透明，针尖大小，湿润似露滴状。涂片染色后镜检，呈革兰染色阴性，细长，弯曲，螺旋状、S型、弧形或海鸥状。尿素酶及氧化酶试验强阳性，触酶试验阳性。经鉴定可确定所分离的细菌为Hp。Hp标准株NCTC11637，通过哥伦比亚固体及布氏肉汤液体培养基复苏均成功。

　　3.2  纸片琼脂扩散法测定抑菌浓度苦豆子总碱≥50 mg/ml时出现抑菌圈，其直径10 mm；苦参碱≥100 mg/ml时出现抑菌圈，其直径9 mm；苦参素≥100 mg/ml时出现抑菌圈，其直径10 mm；槐定碱≥200 mg/ml时出现抑菌圈，其直径8 mm；槐果碱在所有浓度下均无抑菌圈出现。表明苦豆子生物碱在体外可能对Hp存在抑制作用。

　　3.3   MIC的测定5种苦豆子生物碱MIC比较见表1。采用液体稀释法对5种待测生物碱的MIC进行测定。结果表明其中4种生物碱对供试细菌具有不同的抑制作用：苦豆子总碱对Hp的抑菌活性较强，MIC为32 mg/ml。苦参碱与苦参素对Hp的MIC为64 mg/ml，槐定碱的MIC为128 mg/ml，体外抑菌活性微弱。槐果碱在体外对Hp无明显抑制作用。表1  各生物碱抗Hp的MIC值（略）

　　4  讨论
   
　　目前Hp的首治根除率只有约70％，补救疗法也有9％～10％的失败率。抗生素耐药是导致根除率下降的主要原因［4］。中药抗菌药物具有安全性高、副作用小，耐药性低，治疗费用少等优势。寻求中西医结合治疗方案已经成为解决根除幽门螺杆菌治疗问题的众多出路之一［5］。
   
　　本实验采用体外微生物敏感性测定方法［6］，首次评价和比较了苦豆子总碱及其4种主要单体生物碱对Hp的体外抑菌效果。实验结果表明，其中4种生物碱对Hp有一定的体外抑菌作用，效果顺序为：苦豆子总碱＞苦参碱＝苦参素＞槐定碱。槐果碱体外对Hp无抑制作用。其中，苦豆子总碱的MIC最小，为32 mg/ml，有望开发成为一种新型的抗Hp中药制剂。
   
　　此次实验结果为研究苦豆子生物碱抗菌活性、抗菌机理以及更合理的开发、利用苦豆子提供了理论依据。下一步研究工作我们将对所筛选出的生物碱成分进行耐药诱导与消除实验、联合药物敏感实验及初步的毒理学评价，为进一步研究打下基础。

【参考文献】
  　　［1］Montalban C,Norman F.Treatment of gastric mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma: Helicobacter pylori eradication and beyond［J］.Expert Rev Anticancer Ther,2006,6(3):361.

　　［2］H.Wu,X.D.Shi,H.T.Wang,et al.Resistance of Helicobacter pylori to metronidazole, tetracycline and amoxycillin［J］.Antimicrobial Chemotherapy, 2000, 46(1): 121.

　　［3］张为民,张彦明,张 涛，等.苦豆子生物碱抑菌抗炎作用研究［J］.动物医学进展,2005,26(10):82.

　　［4］胡品津,胡伏莲.中华医学会第四次全国幽门螺杆菌学术会议纪要［J］.中华消化杂志,2005,25(11):698.
　　
　　［5］吴 静,王克霞,胡联华.黄连对幽门螺杆菌的体外抗菌活性研究［J］.时珍国医国药,2006,17(12):2486.

　　［6］Francis Megraud,Norbert Lehn,Tore lind,et al.Antimicrobial susceptibility testing of Helicobacter pylori in a large multicenter trial: the MACH 2 study ［J］.Antimicrobial Agents and Chemotherapy,1999,43(11):2747