山东不同产地单叶蔓荆子聚丙烯酰胺凝胶电泳实验研究

　　2.2 过氧化物酶(POD)同工酶电泳

　　2.2.1 样品液制备 称取新鲜蔓荆子样品1 g，冰浴研磨，加入1 ml电极缓冲液(pH 8.3)，冰浴超声提取30 min，8 000 r/min，0℃离心15 min，上清液加等体积40%蔗糖溶液混匀，置冰箱内冷藏，备用。

　　2.2.2 电泳与染色电泳方法同上。取出胶板,标记前沿。将胶板浸于醋酸联苯胺液内, 加2～3滴30%双氧水，常温下染色，很快出现蓝色谱带，不久变为棕红色，弃去染色液，凝胶板用蒸馏水冲洗后保存于7%的醋酸溶液中。

　　2.2.3 谱带分析 同工酶电泳谱带用EDAS-290凝胶成像紫外分析仪成像分析。结果见图3~4。1，2：威海蔓荆子;3，4：大汶河蔓荆子;5，6，7，8：牟平蔓荆子图3同工酶电泳指纹图谱

　　3结果

　　由图1可以看出3个不同产地单叶蔓荆子的蛋白质PAGE指纹图谱无显著性差异：谱带位置、条数、带型无差异，说明含有相同类型的蛋白质。牟平蔓荆子谱带清晰度低于威海、大汶河样品，可能与样品有效成分含量不同有关。由图2可看出：以威海蔓荆子蛋白质电泳图谱为标准，威海蔓荆子与牟平蔓荆子相似度为91.01%，而大汶河蔓荆子与威海蔓荆子相似度分别为89.86%，88.59%。可知生长在两海滩沙地的蔓荆子相似度更大。Lane 1 威海蔓荆子;Lane 2、3 大汶蔓荆子;Lane 4 牟平蔓荆子图4同工酶谱带相似度分析图谱由图3可知3个不同产地的蔓荆子过氧化物酶同工酶电泳图谱共有6条谱带，谱带位置、带型无差异，说明3样品含有相同类型的过氧化物酶。牟平蔓荆子谱带清晰度低于威海、大汶河样品，可能是因为样品有效成分含量不同。由图4可知：威海蔓荆子与牟平蔓荆子相似度为97.48%，而大汶河蔓荆子与威海蔓荆子相似度分别为91.78%，90.57%。可知生长在海滩的蔓荆子中含有的同工酶含量更相近。

　　4讨论

　　3种蔓荆子均来源于马鞭草科植物单叶蔓荆的果实，外观性状上很难区分，蛋白质电泳指纹图谱、过氧化物酶同工酶指纹图谱谱带条数、位置均无显著差异也表明了样品间密切的亲缘关系。蛋白质是植物基因表达的产物，不同的品种、杂交种具有不同的蛋白质谱带模式[6]，同工酶能准确反应基因的存在状况和表达规律。用Pro-PAGE电泳指纹图谱可以有效地鉴别植物的品种，POD-PAGE指纹图谱可以鉴别不同产地的药材。由蛋白质电泳、过氧化物酶同工酶电泳结果初步可知两种不同生境下的单叶蔓荆子所含蛋白质、过氧化物酶同工酶种类无差异。

【参考文献】
  　[1]国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社,2005：252.

　　[2]彭艳丽，刘红燕，张炳桢.山东不同产地单叶蔓荆子挥发油GC-MS分析[J].山东中医药大学学报，2005，29(2)：146.

　　[3]徐榕青，林玉霖，林文津，等.不同产地蔓荆子生药材中总黄酮含量的比较研究[J].中药材，2008，31(2)：243.

　　[4]顾一珠，马君一，李明，等.玫瑰花聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别研究[J].药物分析杂志，2009，29(5)：819.

　　[5]石俊英.中药电泳鉴别法及其在药用植物、动物中的应用研究[J].山东中医学院学报，1995，19(2)：74.

　　[6]石俊英，巩丽丽，张会敏.不同产地桔梗的聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱鉴别研究[J].中国药学杂志，2007，42(19)：1462.