北五味子中4种木脂素类化合物的高效液相色谱法同时测定

　　3.8干扰实验实验中用到甲醇作洗脱溶剂，在检测范围内很可能出现甲醇溶剂峰的干扰[13]，为此取少量甲醇用氮气吹干仪吹干后，用流动相定容，在上述确定的色谱条件下进样测定，结果表明甲醇在3 min时出峰，而样品中待测物质第一峰的出峰时间为13 min，说明甲醇溶剂峰对4种组分的分析不产生干扰。

　　3.9标准曲线分别移取浓度为1 000 μg/ml的4种木脂素标准储备液0.02，0.08，0.20，0.40，1.00，2.00 ml于10 ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，配制成浓度为2.00，8.00，20.00，40.00，100.00，200.00 μg/ml 的标准系列溶液，按最佳色谱条件进样分析，以峰面积为纵坐标，以对应的浓度为横坐标做各种组分的标准曲线，如图2所示。经线性回归计算，得到4种化合物的线性方程及相关系数。见表2。由表2可以看出，该4种化合物的线性关系良好，相关系数在0.9994～0.9998之间，可以满足日常分析的要求。

　　3.10检出限和线性范围检出限又称敏感度，是指产生一个能够确证在试样中存在的分析信号所需要的该组分的最小含量。亦即待测组分所产生的信号强度等于其噪声强度标准偏差三倍时所对应的质量浓度或质量，用最小检测浓度μg/ml(μg/g)或最小检测质量μg/ng来表示。检出限是衡量一个分析方法的重要指标，它能更全面地反映检测器质量，检测方法的灵敏度[14]。为此在最佳色谱条件下测定了4种化合物的检出限及线性范围。结果见表3。由表3可以看出，本实验建立的HPLC分析北五味子中4种木脂素成分的方法灵敏度高、检出限低、线性范围宽。图23种组分的标准曲线经线性回归计算，得到4种化合物的线性方程及相关系数见表2。表2标准曲线的回归方程及相关系数表3各组分的检出限及线性范围　3.11仪器精密度实验实验在最佳色谱条件下，以1.00 μg/ml的标准溶液平行测定18次，由测定结果可以看出，4种物质的相对标准偏差均小于3.0%，测定结果的可靠性可以满足分析的要求。

　　3.12样品测定在最佳实验条件下，测定北五味子样品中4种组分的分析结果见表4。表4北五味子的分析结果

　　3.13回收率实验本实验采用标准加入法进行回收率实验。取北五味子2号样品0.100 0 g，加入2 ml 200 μg/ml的标准溶液，即提取液中各组分的浓度为40 μg/ml，按前述提取方法平行实验7次，由实验得出，五味子中4种组分的平均回收率为90.23%～95.24%，相对标准偏差为3.2%～4.9%。说明该方法的准确度和精密度较高，可以满足日常分析检测的要求。

　　3.14标准溶液的稳定性为考察溶液的稳定性[15]，配制浓度为40.00 μg/ml使用液，密封避光保存。在不同的时间进样测定，实验结果表明，浓度为40.00 μg/ml标准溶液在第20天时五味子醇甲、五味子酯甲和五味子乙素的变化率都超过了10%，在第10天时4种物质的变化率均小于10%，说明标准溶液在10 d内是基本稳定的。峰面积的升高，说明溶液浓度在增大，溶剂挥发，因此，标准溶液应放置于温度低的地方，使用时注意防止挥发。

　　4结论

　　采用高效液相色谱法测定北五味子中木脂素类化合物的含量，通过实验得到以下结论。①通过条件实验，确定了最佳实验条件：Diamonsil(钻石)C18柱;DAD检测器检测，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的检测波长均为216 nm，五味子酯甲的检测波长为222 nm;流动相乙腈-水，采用梯度洗脱，洗脱程序为0～25 min乙腈:水=50∶50(V/V)，25～35 min流动相比例线性变化到70∶30(VV)，35～40 min保持乙腈:水=70∶30(V/V)，40～44 min再线性变化到80∶20(V/V);柱温25℃;流速0.8 ml/min;进样量10.0 μl。②在最佳实验条件下4种木脂素类化合物能与样品中其他杂质达到良好的分离，通过定性分析4种物质的出峰顺序为五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素。③在最佳色谱条件下绘制标准曲线，在0.15～200 μg/ml的范围内线性良好，相关系数为0.999 4～0.999 8。经计算各组分的最小检测浓度为0.04～0.05 μg/ml。④本实验对样品进行了测定，并考察了方法的精密度和准确度。对样品进行了加标回收实验，平均回收率为90.23%～95.24%，相对标准偏差为3.2%～4.9%。说明该方法的准确度和精密度较高，可以满足日常分析检测的要求。本研究所建立的高效液相色谱法简便、灵敏、准确、线性范围宽，适用于木脂素类化合物的分析。

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