六味地黄颗粒对哮喘大鼠炎症介质白三烯β4、白三烯C4及5脂氧合酶影响的研究
作者：李志峰，王力宁，黄小琪，陈晶，
梁丽英，欧海玲， 文亦磊， 刘含，郭宇航
【摘要】 目的探讨六味地黄颗粒对哮喘大鼠炎症介质白三烯β4(LTB4)、白三烯C4(LTC4)及5脂氧合酶(5-LO)含量的影响。方法将SFP级SD大鼠160只随机分为8组，每组20只。除空白对照组和生理盐水组外，其余各组均以卵蛋白(OVA)辅以氢氧化铝凝胶为佐剂注射致敏，2周后雾化吸入2%OVA激发哮喘，建立哮喘模型，从实验第8天，各组分别用药干预，生理盐水组用生理盐水腹腔注射及吸入代替，空白对照组不予处理，造模时间共28d，取材后，高倍镜下观察各组大鼠肺及支气管的病理学改变;采用ELISA法检测肺组织匀浆中LTB4、LTC4的浓度。对大鼠肺组织中5-LO含量进行免疫组化评估。结果六味地黄颗粒组、六味地黄颗粒辅助地塞米松组、六味地黄颗粒辅助布地奈德组肺组织中LTB4、LTC4的浓度明显低于哮喘模型组(P<0.05)。各用药组肺组织中5-LO含量与哮喘模型组比较并无明显差异(P>0.05)。结论六味地黄颗粒在治疗哮喘过程中可能抑制肺组织中LTB4、LTC4 分泌，这可能是其治疗哮喘的作用靶点之一。
【关键词】 六味地黄颗粒; 炎症介质白三烯β4; 白三烯C4; 5脂氧合酶; 哮喘
支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞包括气道的炎症细胞和结构细胞(如嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分(cellular elements)参与的气道慢性炎症性疾病[1]。近年来其患病率在全球范围内有逐年增加的趋势。中医学运用补肾法治疗哮喘已经积累了丰富的临床经验， 笔者选择中医儿科古方六味地黄丸颗粒剂配合气道吸入糖皮质激素，观察其对哮喘大鼠肺组织中炎症介质白三烯B4(LTB4)、白三烯C4(LTC4)及5-脂氧合酶(5-LO)的影响，探讨六味地黄颗粒及辅助糖皮质激素对参与哮喘慢性炎症过程中相关炎性介质的影响。
1 材料与仪器
1.1 动物选用SPF级SD大鼠160只，4～6周龄，雄性，体质量(150±20)g ，上海斯莱克动物实验中心提供，动物许可证号：SCXK(沪)2007-0005。
1.2 药物六味地黄颗粒的组成：根据钱乙《小儿药证直诀》中六味地黄丸的组方，即熟地黄、山萸肉、干山药、泽泻、牡丹皮、白茯苓，按8∶4∶4∶3∶3∶3比例制成免煎中药饮片颗粒剂，每包含生药10 g，由江阴天江药业有限公司生产(批号：0903027)，温开水调制每毫升含生药1 g。地塞米松注射液，400 mg/L，由郑州羚锐制药股份有限公司生产(批号：0807292);吸入用布地奈德混悬液，1 mg/2ml，由广西医药公司提供(批号：305551)。
1.3 试剂与仪器卵清蛋白，由恒因生物有限公司提供(批号：0907232);氢氧化铝凝胶分析纯，由天津市博迪化工有限公司提供(批号：20080603);LTB4试剂盒、LTC4试剂盒，由大连泛帮生物有限公司提供(批号：70621S);5-LO免疫组化染色试剂盒，上海晶天生物有限公司提供;生理盐水若干。压缩雾化吸入机， 德国百瑞有限公司生产(型号：ARI-1205);自动化酶免分析仪，北京石天医疗制作所生产(型号：SM-3 );显微镜;离心机;16L密闭整理箱等。
2 方法
2.1 动物分组及处理将大鼠按体质量(非被试因素)分为4层，然后在分层基础上按随机数字表法随机分为8组，每组20只。分别为六味地黄颗粒组(A组)，六味地黄颗粒辅助地塞米松组(B组)，地塞米松组(C组)，六味地黄颗粒辅助布地奈德组(D组)，布地奈德组(E组)，哮喘模型组(F组)，生理盐水组(G组)、空白对照组(H组)。
参照迟磊等[2]使用的方法，并稍加改进复制大鼠哮喘模型，方法如下：除G、H组外，各组分别于第1天、第8天用新鲜配制的卵蛋白(OVA100 mg)辅以氢氧化铝佐剂200 mg及生理盐水l ml混悬液在大鼠两腹股沟、后足跖，共4点做皮下注射，每点0.2 ml、同时腹腔注射0.2 ml。G组以腹腔注射生理盐水代替;于实验第8天即第2次致敏的同一天开始，A组、B组及D组大鼠胃饲六味地黄颗粒剂20 g/(kg·d)，C组、E组、F组及G组大鼠均胃饲等量生理盐水，第15～28天每天喂药后除G、H组外分组将致敏的大鼠置于密闭容器内用超声雾化器雾化吸入2%OVA生理盐水悬液，30 min/d，进行激发。同时每次激发前1 h,B组及C组分别预先吸入400 mg/L地塞米松20 min，D组及E组分别吸入1 mg/3 ml布地奈德混悬液15 min，A组、F组及G组以雾化吸入生理盐水代替，方法同上。H组不做任何处理，各组除施加以上药物因素处理外其日常饲养方法均相同。可以自由进食常规饲料和水。第29天处死大鼠。