毛冬青酸性、酚性及皂苷类成分分离鉴定
作者：曾宪仪，李玉云，徐晓艳，李后如，吴迪，李艳，王丽静
【摘要】 目的分离、鉴定毛冬青(Ilex pubescens )中的酸性、酚性、皂苷类化学成分。方法采用水提、醇沉 、醋酸乙酯萃取或乙醇提取，硅胶柱色谱方法进行分离，得到11个化学成分，运用IR、UV、MS、1H-NMR和13C-NMR等光谱法鉴定化合物结构。结果分离鉴定了11个化合物： 3，4-二羟基苯甲醛 (1);decumbic acid(2);富马酸(3);3，4-二咖啡酰鸡纳酸(4);琥珀酸(5);ilexgenin A(6)，毛冬青皂苷B1(7);毛冬青皂苷B2(8);毛冬青皂苷甲(9);毛冬青酸(10)和β-谷甾醇(11)。结论化合物2～5是首次从该植物中分得，其中化合物2为首次从高等植物中获得，化合物10是首次从天然产物中获得，根据DEPT碳谱，首次对其碳信号进行了归属。
【关键词】 毛冬青; 有机酸; 酚性化合物; 皂苷
Abstract：ObjectiveTo isolate acidity,phenolic、tritepene saponins from the roots of Ilex pubescens and to identify their structures.
MethodsThe compounds were isolated by solvent extract and silica gel chromatography and their structures were determined by IR, UV, MS,1H NMR,13C NMR etc..
ResultsEleven compounds were isolated from Ilex pubescens.They were identified as protocatechuic aldehyde(1)，decumbic acid(2)，fumanric acid(3)，3，4-dicaffeoyl-quinic acid(4)，succinic acid(5)，ilexgenin A(6)，ilexsaponin B1(7)，ilexsaponin B2(8)，ilexsaponin A1(9)，ilexolic acid(10)andβ-sitostrol(11).
ConclusionCompounds(2～5)was obtained from the plant for the first time，in which (2)was first isolated from higher plant,and (10)was obtained from the natural product for the first time and its 13CNMR signal was assigned by DEPT.
Key words： Ilex pubescens; Organic acids; Phenolic; Tritepene saponins
毛冬青为冬青科植物毛冬青Ilex pubescens Hook.et Arn.的干燥根，分布于我国南方各省，它具有活血通脉、 消肿止痛、 清热解毒功效，在临床上主要用于治疗脉管炎和冠心病等，有较好疗效，我们在对其有效成分进行研究时，从根的水提、 醇沉 、醋酸乙酯提取部位，分离到3个酸性成分、2个酚性成分，从根的乙醇提取部位分离到6个皂苷类成分。根据其理化性质并综合运用光谱技术分别鉴定为：3，4-二羟基苯甲醛(1);decumbic acid(2);富马酸(3); 3，4-二咖啡酰鸡纳酸(4);琥珀酸(5);ilexgenin A(6)，毛冬青皂苷B1(7);毛冬青皂苷B2(8);毛冬青皂苷甲(9),毛冬青酸(10)和β-谷甾醇(11)。化合物(2)～(5)是首次从该植物中分得，其中化合物(2)最早是从青霉菌Penicillum decumbea的代谢物中得到，此后又从肉桂枝枯病菌Lasiodiplodia theobromae的代谢物中获得[1]，本文是首次从高等植物中获得，化合物(10)是首次从天然产物中获得，结合DEPT碳谱，首次对其碳信号进行了归属。
1 仪器与材料
熔点用Yanaco显微熔点仪测定;IR用Shimadau-400或 Spectrum One 红外光谱仪测定;UV用PE lambda 12紫外光谱仪测定; MS用VG ZAB-2F 质谱仪测定;HRMS用Autospec - UltimaETOF质谱仪测定;1H-NMR和13C-NMR用INOVA-500、buruck-400、vns-600核磁共振仪测定。薄层色谱和柱色谱硅胶(160～200目)为青岛海洋化工厂产品。溶剂均为分析纯。实验药材采于江西大茅山，由江西省药物研究所朱良辉副研究员鉴定为毛冬青(Ilex pubescens Hook.et Arn. )。
2 方法
2.1 酚酸成分的提取分离取毛冬青根粉碎(25 kg)，加水煎煮3次，每次2 h，合并煎液，浓缩，加入乙醇使含醇量达到70%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，用10%HCl调pH至3.0，静置，离心。上清液用醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯液，回收溶剂，残留物用热水提取5次，合并水提取液，冷藏一夜，滤过，滤液再用醋酸乙酯萃取5次，合并萃取液，回收溶剂，得固体物。取固体物上聚酰胺柱层析，依次用水、30%，50%乙醇洗脱，蒸干。水洗部分经硅胶柱层析得成分(2)，(3)，(5);30%洗脱部分经硅胶柱层析和苯重结晶得成分(1)，50%洗脱部分经硅胶柱多次层析得成分(4)。
2.2 皂苷的提取分离取毛冬青细枝、叶，0.6 kg，加水煎煮，浓缩，乙醇沉淀，滤过，滤液挥去溶剂，残留物加少量水稀释，用盐酸调pH至3，用醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯萃取部分回收溶剂后经硅胶柱层析，依次用石油醚∶醋酸乙酯∶甲酸(6∶4∶0.01)、(2∶8∶0.01)和醋酸乙酯洗脱，后者得化合物(9)。取毛冬青根7 kg，粉碎，同上处理，得醋酸乙酯萃取部分，回收溶剂后经硅胶柱层析，石油醚：醋酸乙酯(7∶3)和(1∶1)洗脱，前者得(10)粗品，乙醇重结晶得化合物成分(10)，后者得成分(6)粗品，乙醇重结晶得化合物(6)。取毛冬青根4.2 kg，粉碎，加80%乙醇回流提取，合并提取液，回收溶剂，残留物离心，取沉淀物进行硅胶柱层析，依次用石油醚 ：醋酸乙酯(8∶2)、(1∶1)和乙醇洗脱，(8∶2)洗脱部分得化合物(11)、(1∶1)洗脱部分得(6)粗品，乙醇重结晶得纯品，乙醇洗脱部分回收溶剂后，经反复柱层析，以醋酸乙酯：甲醇(95∶5)～(80∶20)洗脱，得化合物(7)、(8)。