Aβ1-40脑内注射对大鼠海马超氧化物歧化酶丙二醛的影响及通络救脑口服液的干预作用

            作者：张晓杰，张春庆，胡南，宫国良，李澎涛

【摘要】  目的观察通络救脑口服液对β-淀粉样蛋白1 - 40 (Aβ1-40 )诱导的AD模型大鼠海马SOD活性和MDA蛋白表达的影响。方法选用140只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组、通络救脑口服液各剂量组(12，24，48 mg·kg-1·d-1)共7组，每组20只。采用海马立体定向注射凝聚态Aβ1 - 40建立老年性痴呆(Alzheimer's disease， AD)动物模型。药物干预4周，第5周应用分光光度法检测大鼠大脑海马组织SOD、MDA蛋白的表达。结果与空白对照组比较，模型组SOD活性明显降低(P<0.05)，而MDA含量明显升高(P<0.05);与模型组比较，盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组SOD活性明显升高(P<0.05)，而MDA含量明显降低(P<0.05)。结论通络救脑口服液通过上调SOD的活性和抑制MDA的表达而发挥其抗氧化治疗老年性痴呆的作用。

【关键词】  阿尔茨海默氏病; 通络救脑口服液; 超氧化物歧化酶; 丙二醛

　　Abstract：ObjectiveTo observe the effect of TLJN Oral Solution on protein SOD, MDA expression in brain tissue of amyloid-β1-40 injection into Hippocampus-induced experimental AD rats in vivo. Methods140 SD rats were enrolled in the study, and they were equally randomly divided into blank control group,sham control group, negative control group, positive control group and experiment group(12,24,48 mg·kg-1·d-1).A rat model of AD was induced by amyloid-β1-40 sterotaxis injection into the bilateral hippocaupa. All rats were sacrificed in the 5th week after treatment for 4 weeks. The total activity of SOD and level of MDA in brain tissue were detected by ultraviolet-spectrophotometry.ResultsThe SOD activity was decreased in model groups (P<0.05)compared with the sham group and MDA level was increased. In experiment groups the SOD activity was increased and MDA content was reduced compared with the model group (P<0.05).ConclusionTLJN Oral Solution can up-regulate expression of SOD and down-regulate expression of MDA. TLJN Oral Solution can inhibit the incidents of Alzheimer's disease by antioxidative effect.

　　Key words：Alzheimer's disease; TLJN Oral Solution; SOD; MDA

　　老年性痴呆(Alzheimer's disease ,AD)又称阿尔茨海默病, 是一种以进行性认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。其特征性病理变化是患者脑内的神经炎性斑，它是细胞外β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积而形成的[1]。阿尔茨海默病是一类多病因疾病，研究表明，自由基损伤和氧化应激是导致阿尔茨海默病大脑神经元损伤的重要原因[2]，血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和丙二醛(malon-dialdehyde,MDA) 与阿尔茨海默病的发生发展有密切的关系[3]。本实验采用大脑海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40的方法建立AD大鼠模型，并用通络救脑口服液进行药物干预，观察通络救脑口服液对AD模型大鼠海马SOD活性和MDA蛋白表达的影响，以探讨通络救脑口服液对AD的防治作用。

　　1 材料与仪器

　　1.1 动物 Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠140只，鼠龄8～12周，体质量(280±10)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2002-0003。经适应性饲养1周，随机分为空白对照组、假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组和通络救脑口服液3个剂量组共7组，每组20只。

　　1.2 药物 通络救脑口服液，由北京中医药大学中药学院制备。盐酸多奈哌齐片由法国PFIZER PGM公司制造，产品批号：5136903。Aβ1-40为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。Aβ1-40使用前用无菌生理盐水稀释成10 μg·μl-1，37℃孵育1周，使其变为聚集状态的Aβ。

　　1.3 试剂 SOD测定试剂盒、MDA测定试剂盒和考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供;其它试均为国产分析纯。

　　1.4 仪器 UV-2550型分光光度计(日本岛津公司);MR1812高速冷冻离心机(法国Jouan);MDF-492超低温冰箱(日本三洋公司);AE-240型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

　　2 方法

　　2.1 动物模型的制作 实验大鼠1%戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉后，立体定向仪固定头部，备皮消毒，沿颅顶中线作2 cm切口，分离骨膜暴露头骨，于前囟向后3.0 mm，中线左右各旁开2.2 mm，用牙科钻打开颅骨，垂直进微量进样器针2.8 mm，将1 μl溶液缓慢注入，注射时间为5 mm，留针5 min。模型组、盐酸多奈哌齐组、通络救脑口服液各剂量组左右侧海马各注射1 μl Aβ1-40(10 μg)溶液，假手术组注射1μl生理盐水。

　　2.2 给药方法 造模后3天开始给药，盐酸多奈哌齐组按0.33 mg·kg-1·d-1，各通络救脑口服液组按12，24，48 mg·kg-1·d-1给药，1次/d灌胃，其余3组给等体积生理盐水，共4周。

　　2.3 SOD活性和MDA含量的测定 行为学测试后，大鼠断头处死，在冰上迅速分离出海马，用冰生理盐水冲净其表面血迹，滤纸拭干后，电子天平称重。按照试剂盒测定SOD活性和MDA含量。

　　2.4 统计学方法 所有数据运用SPSS13. 0 软件包进行处理，数据以± s表示，统计分析采用完全随机设计资料的方差分析，组间两两比较运用SNK检验，P<0.05为差异有显著性。