HPLC法测定五黄膏中没食子酸的含量

　　2.4 供试品溶液的制备

　　取本品0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50 mL,密塞,摇匀,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 ?m)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。

　　2.5 线性关系的考察

　　精密吸取没食子酸对照品溶液(0.094 6 mg/mL)2、4、8、12、16、20 ?L,注入液相色谱仪,记录峰面积。以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线方程为：A=3.877×106+2.468×103,r=0.999 9(n=6)。没食子酸在0.189 2～1.892 ?g

　　范围内线性关系良好。

　　2.6 精密度试验

　　精密吸取同一供试品溶液(批号060832)10 ?L,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定。重复测定6次,没食子酸峰面积RSD=0.25%。

　　2.7 稳定性试验

　　精密吸取同一供试品溶液(批号060832)10 ?L,分别于配制后0、4、8、12、24 h测定,测得峰面积RSD=0.27%,表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

　　2.8 重复性试验

　　取同一批样品(批号060832)6份,分别按样品测定法测定,求得RSD=0.94%,结果表明方法重复性良好。

　　2.9 加样回收率试验

　　精密称取已知含量的同一批样品(批号060832,6.317 mg/g) 0.25 g,分别精密加入没食子酸对照品溶液(0.060 72 mg/mL) 25 mL,再精密加入50%甲醇25 mL,按上述供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定,计算回收率。结果见表2。

　　2.10 样品的测定

　　在批号为060833、060834、060835、060836、060837的5批样品中没食子酸含量分别为6.6、6.6、5.3、6.4、6.4 mg/g。　表2 加样回收率试验结果

　　3 讨论

　　因为五黄膏中的五倍子为原粉入药,直接发挥药效,所以供试品溶液提取方法未选择测定水解后的没食子酸,而选择直接提取进行测定。又因是软膏剂,基质较多,影响色谱峰的重现性,故选择了梯度洗脱的方法。

　　供试品溶液的提取方法,考察了甲醇和50%甲醇为溶剂,超声和回流提取30、60、90 min,结果表明,采用50%甲醇为溶剂,回流提取60 min的方法,提取较为完全。

【参考文献】
  [1] 国家药典委员会.国家药品标准——新药转正标准(第10册)[S].北京：人民卫生出版社,1997.40.