CpG ODN增强乙肝疫苗免疫反应的研究
2.2 小鼠免疫后3～8周外周血中乙肝表面抗体的平均滴度变化
在第3～8周时间内，第4周乙肝表面抗原和高剂量CpG ODN联合免疫组、疫苗和中剂量CpG ODN联合免疫组之间的抗体滴度差异有显著性(P<0.05);在其他时间点上，乙肝表面抗原和高剂量CpG ODN联合免疫组的抗体滴度与其他组别差异均有非常显著性(P<0.01)，并持续快速升高。乙肝表面抗原和中剂量CpG ODN联合免疫组、乙肝表面抗原和低剂量CpG ODN联合免疫组的抗体滴度从第3周之后均逐渐升高，在第3、4、5、6周时间点上，只有第4周两组之间差异有显著性 (P<0.05)，其他时间点差异均无显著性 (P<0.05);到第7、8周时两组差异有显著性(P<0.05)。对于乙肝表面抗原单用组，虽然抗体滴度有逐渐升高的趋势，但却一直处于比较低的水平，除了第4周与乙肝表面抗原和低剂量CpG ODN联合免疫组之间的抗体滴度差异无显著性外(P>0.05)，其他时间点上与其他各组差异均有显著性(P<0.05)。见图2和表2。表2 免疫3～8周HBsAb滴度对数转换数据
3 讨 论
对于CpG ODN的免疫刺激作用人们已经进行了大量的研究。在应用方面，人们较为关注其安全、有效的佐剂特性。因为CpG ODN能同时增强抗原特异性体液免疫应答和细胞免疫应答，尤其对细胞免疫应答具有更突出的增强作用[4]。本实验发现,应用CpG ODN作为乙肝表面抗原的佐剂，能较早较快地刺激机体产生乙肝表面抗体，CpG ODN作为佐剂使用增强乙肝表面抗原的免疫效应，CpG ODN的使用量在实验的剂量范围内具有一定的剂量效应关系，高剂量的CpG ODN的使用对增强乙肝表面抗原的免疫效应效果更早更好。由实验数据观察来看，单纯的乙肝表面抗原抗原性是较弱的，搭配佐剂使用，才能有效地提高乙肝表面抗原的免疫原性[5]，提高乙肝表面抗原的免疫效果。实验剂量范围内，增强乙肝疫苗抗原抗体反应是显著的，并且动物也无逆毛、腹泻、发热或其他中毒现象等任何异常，表明CpG ODN的使用是安全可靠的。
CpG ODN的作用是通过有Toll样受体家族的细胞，主要是TLR9受体识别CpG的基序，从而通过若干信号传递途径活化转录因子，启动相关细胞因子的基因转录[6]。本实验所用的CpG ODN是将60 bp磷酸二脂修饰的ODN与pUC18载体体外连接构建的重组质粒pUC18ODNs，更真实地模拟了天然的包含CpG基序的非甲基化的ODN。在免疫过程中，CpG ODN以模拟细菌感染的方式激活了细胞经由TLR9通道的固有免疫[6]，由于CpG ODN仅仅是一段DNA序列，在激活免疫的同时不具有感染性，小鼠未发生任何炎性反应[7,8]。同时，CpG ODN激活了体内的免疫细胞，调动了免疫系统，使乙肝疫苗能够较早较快的产生免疫反应[7,8]。由于CpG ODN的免疫刺激作用，小鼠的机体可以较长时间的处于免疫活化状态，免疫细胞免疫活性高，乙肝表面抗体得以长期高水平的经由B细胞分泌[7,8]。在有的实验中，大量的细菌DNA产生抗双链DNA的自身抗体，加重小鼠的自身免疫性疾病;在本实验中使用CpG ODN，乙肝表面抗体产生早，滴度高，持续久，并且安全可靠。在应用CpG ODN作为乙肝疫苗佐剂的临床试验中，首次和第2次免疫后抗体水平甚至可以提高13～45倍[9];同时，由于CpG对CD8+T细胞刺激作用，诱导的CTL细胞在细胞免疫作用杀伤肿瘤以及治疗胞内感染也具有很好的应用前景[10]。但是对长期性观察的缺失，还不能够全面反映CpG ODN的作用效果，长期效应的机制也未被揭开。
本研究结果表明，本实验室制备的CpG ODN作为乙肝表面抗原的佐剂能较早较快地促进乙肝表面抗原的抗原抗体反应，并且安全可靠。在长期效应上，CpG ODN作为佐剂对维持乙肝表面抗体的有效滴度具有长期效应。
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