补肾益肺化淤法对大鼠慢性阻塞性肺病肺功能的影响
作者：梁喜章，曹勇，陈伟军，谭碧珠
【摘要】 目的探讨补肾益肺化淤法对慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型肺功能的影响。方法采用气管内注射脂多糖合被动吸烟建立COPD大鼠模型，作血气分析和肺组织切片行苏木素-伊红(HE)染色，观察补肾益肺化淤法对COPD大鼠肺功能及形态学的影响。结果模型组出现咳嗽、气急、喘息等COPD典型症状;血气分析出现低氧血症、高碳酸血症;肺组织病理学可见支气管表现出不同程度的慢性炎性细胞浸润，肺泡扩大，肺泡壁断裂，部分肺泡融合形成肺大泡。治疗组给予中药汤剂后，各项指标得到改善，且高剂量组优于低剂量组。结论补肾益肺化淤法可以改善COPD大鼠全身及呼吸系统症状，缓解肺功能下降。
【关键词】 慢性阻塞性肺病; 补肾益肺化淤法; 血气分析; 肺组织切片
慢性阻塞性肺病(COPD) ， 在我国每年造成的死亡可达100万人，致残人数高达500万～1 000万，严重危害人们的生命健康及生活质量[1]。我们根据COPD的临床特点和中医理论，认为肺肾两虚是本病的主要发病机制，外邪侵袭是其发病的外在条件，痰淤互结是其形成的重要病理基础，于是针对本病拟定了补肾益肺化淤法。本实验采用气管内注射脂多糖合被动吸烟法建立大鼠COPD模型，观察补肾益肺化淤法对大鼠COPD的作用效果和机制，以期为临床补肾益肺化淤法治疗COPD提供实验依据。
1 材料
1.1 药物补肾益肺化瘀中药由补骨脂、菟丝子、党参、山药、赤芍、黄芪、葶苈子、法半夏单味中药免煎颗粒组成，购于暨南大学附属第一医院(深圳三九医药股份有限公司生产)，用灭菌温蒸馏水配成相当于原生药材浓度的2.7 g/ml浓缩液，置4℃冰箱备用。
1.2 动物健康清洁级SD大鼠，体质量(180±20)g，3月龄，雌雄各半，购于中山大学实验动物中心，合格证号：No.0033311.SCXK(粤)：2004-0011，粤监证号：2008A010。
2 方法
2.1 COPD大鼠模型的建立将大鼠随机分成模型组，中药高剂量治疗组、低剂量治疗组、空白对照组4组，每组8只，雌雄各半。采用气管内注射脂多糖合被动吸烟方法分别对模型组、中药高剂量治疗组、低剂量治疗组大鼠进行造模：①气管内注射脂多糖：于第1，14天用1%戊巴比妥钠(50 mg/kg) 对大鼠进行腹腔注射麻醉， 将其仰卧位固定于大鼠固定板，在光线充足的条件下，暴露声门，以拔除针芯的16号静脉套管针快速插入气管，取溶于生理盐水的脂多糖200 μl (1 mg/ml)通过静脉套管针快速注入气管，然后将大鼠固定板垂直旋转，使脂多糖液能够均匀分布于两肺，再拔出套管针[2];②被动吸烟：将大鼠置于20 cm×30 cm×40 cm熏箱内，隔天给予8支香烟烟熏20 min，连续熏吸1个月，其中第1天和第14天不予熏吸，而进行气管内注入脂多糖。
2.2 实验方法造模后，中药高剂量组按30 g/kg(相当于成人常规临床用量18倍)给予补肾益肺化瘀中药灌胃;低剂量组按10 g/kg(相当于成人常规临床用量6倍)给予补肾益肺化瘀中药灌胃;空白对照组和模型组，正常喂饲，灌服等容积生理盐水1次/d，连续30 d。
2.3 实验观察与指标检查
2.3.1 一般情况观察每天定时观察记录大鼠活动度、精神、皮毛及饮食、呼吸、死亡等情况。
2.3.2 血气分析测定在灌药治疗结束后次日采清晨空腹血。先用100 u/ml的肝素湿润1 ml注射器内壁。具体操作如下：将2 ml 的浓肝素(12 500 u/ml)全部加到100 ml 的生理盐水瓶中混匀，用注射器吸取稀释的肝素0.2 ml，将肝素来回抽动，使针管全部湿润，然后将多余的肝素全部排出，注射器死腔残留的肝素即可抗凝。注意湿润内壁后除残留于死腔(包括针尖部分)外，应尽排弃出去，排尽空气。对大鼠进行麻醉，剖开大鼠腹部，找取腹主动脉，随后用肝素湿润后的1 ml注射器抽大鼠腹主动脉血0.8 ml左右，针头迅速刺入橡皮塞，用手搓动针筒，使血液与肝素混合，放进冰袋迅速送血气分析仪分析。
2.3.3 病理标本检查进行完“2.3.2”项步骤后，腹主动脉放血处死大鼠，迅速剪下右肺中下叶，并放入中性福尔马林中浸泡，石蜡包埋切片，作苏木素-伊红(HE)染色，再将制好的切片于光学显微镜观察拍片。
2.4 统计学处理用SPSS 11.5统计软件进行数据处理，实验结果±s，q检验作统计学分析。
3 结果
3.1 一般情况在造模过程中，大鼠出现咳嗽、气促、喘息、呼吸道分泌物增多，以及体质量下降、毛枯易脱、蜷卧少动、大便干硬等症状改变。经中药治疗后，气喘、咳嗽症状不同程度减轻，口鼻分泌物减少。空白对照组大鼠精神正常，活泼好动，体肥，皮毛光泽无脱落。
3.2 补肾益肺化瘀中药对COPD大鼠动脉血pH、PaO2、PaCO2的影响结果见表1。中药高、低剂量组PaO2均显著高于模型组(P<0.05)，其PaCO2均显著低于模型组(P<0.05)。表1 各组大鼠 pH、PaO2、PaCO2 比较