不同来源降香中柚皮素与异甘草素含量的高效液相色谱测定

　　2.3.5  稳定性考察精密吸取降香供试品溶液5 μl，在0，1，3，6，12 h，按“2.3.1”项下色谱条件测定柚皮素和异甘草素的峰面积，分别以柚皮素和异甘草素工作曲线计算。柚皮素的测定结果为 =4.668 μg，RSD=0.47%(n=5)，提示样品中柚皮素含量在12 h内稳定。异甘草素测定结果为 =7.092 μg，RSD=1.01%(n=5)，提示样品中异甘草素含量在12 h内稳定。结果见表4。表4  柚皮素和异甘草素稳定性考察（略）

　　2.3.6  重复性考察取同一号样品5份，按供试品溶液制备方法平行处理，依法测定，求得RSD为1.43%。说明该方法重复性良好。

　　2.3.7  各样品的含量测定精密吸取样品溶液10 μl，按“2.3.1”项下色谱条件测定柚皮素的峰面积，以柚皮素的工作曲线计算各样品中的柚皮素含量，同样测定异甘草素的峰面积，以异甘草素的工作曲线计算各样品中的异甘草素含量。结果见表5。表5  各样品中柚皮素和异甘草素含量（略）
   
　　本实验对11个市售降香药材的分析表明，降香中的柚皮素含量在2.585～5.429 mg/g之间，异甘草素含量在7.526～28.329 mg/g之间。
   
　　降香样品（以样品1为例）在372 nm和290 nm下的HPLC图谱见图1～2。

　　3  讨论
   
　　降香中含有多种黄酮类成分。其中，本实验已分离出的柚皮素和异甘草素含量较大且其药理活性与降香药材的药理作用相似，故选用这两种化合物为指标测定含量，为降香的质量控制奠定理论基础。
   
　　通过正交设计实验对提取总黄酮的次数、时间、温度和乙醇浓度进行了考察，确定了本文的提取方法。
   
　　本实验选用的两种对照品异甘草素和柚皮素经紫外扫描分别在290 nm和372 nm处有最大吸收。使用PDA检测器，得到200～400 nm范围内的全波长图谱，分别选取290 nm和372 nm下的HPLC分离得到的紫外吸收图谱，建立各自的工作曲线，并测定相应波长下的峰面积从而定量。
   
　　选择流速1.0 ml/min，调整甲醇、水的比例，发现当两者比例为6∶4时分离较好，但是峰形不够好。所以在流动相中加入一定比例的磷酸，当流动相为甲醇-0.2%磷酸水(60∶40)时，异甘草素和柚皮素的峰均能较好的与其他峰实现分离。
   
　　实验表明降香药材中的异甘草素含量高于柚皮素含量。从广西购入的降香中柚皮素与异甘草素含量均较高。实验结果显示不同来源的降香药材中柚皮素与异甘草素的含量差异较大。
   
　　本研究建立了HPLC法测定降香中柚皮素和异甘草素含量的方法，该方法线性关系及重现性良好，方法稳定准确，操作简便。

【参考文献】
  　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005:158.

　　［2］郭丽冰，王蕾.降香中黄酮类化学成分研究［J］.中草药，2008，39(8):1147.