扁枝石松中石杉型三萜成分研究

                作者：张荣祥， 都姣娇，杨娟，杨小生 

【摘要】  目的对扁枝石松全草80 %乙醇提取物中的石杉型三萜类化学成分进行研究。方法利用正相和反相硅胶柱色谱方法进行分离纯化，通过MS, 1H-NMR, 13C-NMR波谱数据鉴定化合物结构。结果从扁枝石松共分离得到7个石杉型三萜类化合物，分别鉴定为serrat-14-en-3β, 21α-diol ①；serrat-14-en-3β, 21β-diol ②； 3β-hydroxy-21α-acetoxy-14-serraten③； 3β, 21β-dihydroxy-14-serraten-24-oic acid (lycernuic acid A, ④；14-serraten-3α, 21β, 24-triol (lycoclavanol, ⑤, 3α, 20β, 21β-trihydroxy-14-serraten- 24-oic acid ⑥；21-episerratenediol-3-α-L-arabinopyranoside (inundoside E, ⑦。结论化合物7为首次从该属植物中分离得到，化合物3为首次从该植物中分到。

【关键词】  扁枝石松； 化学成分； 石杉型三萜

　　Abstract：ObjectiveTo study the serratene-type triterpenoids from the 80 % alcohol extract of Diphasiastrum complanatum.MethodsThe compounds were isolated and purified by silica gel, C18 reverse-phase silica gel column chromatographic methods,  and their structures were elucidated by spectral analysis. ResultsSeven serratene-type triterpenoids were obtained and identified as serrat-14-en-3β, 21α-diol (1), serrat-14-en-3β, 21β-diol (2), 3β-hydroxy-21α-acetoxy- 14-serraten (3), 3β, 21β-dihydroxy-14-serraten-24-oic acid (lycernuic acid A, 4 ) , 14-serraten-3α, 21β, 24-triol (lycoclavanol, 5 ), 3α, 20β, 21β-trihydroxy-14-serraten-24-oic acid (6), 21- episerratenediol-3-α-L-arabinopyranoside (inundoside E, 7 ). ConclusionCompound 7 was isolated from Diphasiastrum and compound 3 from the plant for the first time.

　　Key words： Diphasiastrum complanatum;   Chemical constituents;   Serratene-type triterpenoids
   
　　扁枝石松 Diphasiastrum complanatum L.属石松科扁枝石松属植物，又名伸筋草、扁心草，具舒筋活血、祛风散寒、通经、消炎等作用，主治风湿骨痛，月经不调，跌打损伤，烧、烫伤等［1］。石松科植物化学成分主要含有石松生物碱［2］和石杉型三萜。石杉型三萜是一类特殊的五环三萜，其中C环为七元环，另外四个环为六元环，七个角甲基或其氧化形式，14-15位常有双键，3位和21位为氧接官能团。据报道该类化合物具有很强的抗肿瘤促进活性、肿瘤化学预防以及抑制白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶活性［3～5］。因此我们对在贵州民间被广泛用于治疗风湿性关节炎、跌打损伤等疾病的扁枝石松进行三萜类化学成分的系统研究，从中分离得到 7个石杉型三萜类化合物，化合物7为首次从该属植物中分得，化合物3为首次从该植物中分到。

　　1  仪器与材料
   
　　Varian INOVA-400型核磁共振波谱仪（TMS为内标）；美国HP公司GC-MS5973型气相色谱-质谱联用仪；反相硅胶填料（YMC GEL ODS-A）日本YMC公司，薄层色谱用硅胶（G60，GF-254）及柱色谱用硅胶（200-300目，300-400目）均为青岛海洋化工集团生产。
   
　　药材于2006-07月购自贵州省贵阳市万东桥药材市场，经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为石松科扁枝石松属植物扁枝石松 Diphasiastrum complanatum L. Holub。

　　2  方法与结果

　　2.1  提取分离15 kg扁枝石松干燥全草，粉碎，用80 % 乙醇（料液比为1∶5） 回流浸提4次，提取时间分别为3 h，3 h，2 h，2 h，合并4次滤液，减压回收乙醇，得粗浸膏。浸膏加适量水混悬，依次以石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取，分别得石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取物210，150，380 g和410 g。石油醚萃取部分经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮 ( 10∶1～1∶0 ) 梯度洗脱，经TLC检识，合并得5部分。其中Fr3部分经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮 ( 8∶1 ) 洗脱，得到化合物1 ( 200 mg ) 和2 ( 120 mg )；Fr4部分经硅胶柱层析，用石油醚-醋酸乙酯 ( 10∶1 ) 洗脱，得到化合物3 ( 300 mg )。氯仿萃取部分经硅胶柱层析，氯仿-甲醇 ( 20∶1～1∶1 ) 梯度洗脱，经TLC检识后合并得4部分，其中Fr3部分经硅胶柱层析，石油醚-丙酮 ( 8∶1～0∶1 ) 梯度洗脱，经TLC检识后合并得Fr3-1，Fr3-2和Fr3-3三部分。Fr3-1经硅胶柱层析，氯仿-甲醇 ( 20∶1) 洗脱得化合物4 (120 mg)；Fr3-2部分经硅胶柱层析，氯仿-甲醇 ( 15∶1 ) 洗脱得化合物5 ( 70 mg )；Fr3-3部分经反相硅胶柱层析，30%、50%、70%、90%甲醇-水洗脱，经TLC检识后合并得Fr3-3-1和 Fr3-3-2两部分，经反复硅胶柱层析，氯仿-甲醇、石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱后得白色粉末6 ( 60 mg ) 和7 ( 40 mg)。

　　2.2  结构鉴定

　　2.2.1  化合物1白色粉末，EI-MS m/z 442［M］+, 427, 409, 391, 234, 220, 207, 189。1H-NMR (400 MHz, CDCl3-MeOD) δ：5.33 (1H, brs, H-15), 3.22 (1H, dd, J = 10.4, 5.6 Hz, H-21), 3.17 (1H, dd, J = 10.4, 6.4 Hz, H-3), 0.96, 0.95, 0.83, 0.82, 0.80, 0.76, 0.67 (s, 7×CH3)；13C NMR (100 MHz, CDCl3-MeOD) δ：38.3 (C-1), 24.9 (C-2), 78.1 (C-3), 37.7 (C-4), 55.4 (C-5), 18.5 (C-6), 44.8 (C-7), 38.5 (C-8), 56.8 (C-9), 36.7 (C-10), 26.6 (C-11), 27.0 (C-12), 62.5 (C-13), 137.8 (C-14), 121.8 (C-15), 23.5 (C-16),  49.2 (C-17), 38.4 (C-18), 35.8 (C-19), 26.8 (C-20), 78.4 (C-21), 36.8 (C-22), 27.5 (C-23), 15.0 (C-24), 15.2 (C-25), 19.3 (C-26), 55.7 (C-27), 12.9 (C-28), 14.1 (C-29), 26.8 (C-30)。其光谱数据与文献［6］报道的serrat-14-en-3β, 21α-diol基本一致。

　　2.2.2  化合物2白色粉末，EI-MS m/z 442 ［M］ +, 427, 409, 302, 284, 269, 255, 234, 220, 207, 189。1H-NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ：5.32 (1H, brs, H-15), 3.45 (1H, brs, H-21), 3.19 (1H, dd, J = 11.6, 4.8 Hz, H-3), 0.97, 0.93, 0.89, 0.83, 0.80, 0.77, 0.69 (s, 7×CH3)。13C-NMR (400 MHz, CDCl3) δ：38.5 (C-1), 25.2 (C-2), 78.8 (C-3), 38.1 (C-4), 55.7 (C-5), 18.9 (C-6), 45.1 (C-7), 38.9 (C-8), 56.8 (C-9), 35.9 (C-10), 25.4 (C-11), 27.1 (C-12), 62.8 (C-13), 138.5 (C-14), 122.0 (C-15), 24.0 (C-16), 43.3 (C-17), 37.1 (C-18), 31.2 (C-19), 27.5 (C-20), 76.2 (C-21), 37.4 (C-22), 28.1 (C-23), 15.4 (C-24), 15.7 (C-25), 19.8 (C-26), 56.2 (C-27), 13.3 (C-28), 21.8 (C-29), 27.7  (C-30)。以上数据与文献［6］报道的serrat-14-en-3β, 21β-diol一致。

　　2.2.3  化合物3白色晶体 (氯仿-甲醇), EI-MS m/z 484 ［M］+, 469, 424, 409, 391, 262, 207, 189。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ：5.32 (1H, brs, H-15), 4.50 (1H, dd, J = 11.2, 4.4 Hz, H-21), 3.18 (1H, dd, J =11.2, 4.4 Hz, H-3), 2.06 (3H, s, CH3COO), 0.97,0.90, 0.84, 0.83, 0.80, 0.77, 0.69 (s, 7×CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ：38.6 (C-1), 27.5 (C-2), 78.8 (C-3), 38.1 (C-4), 55.7 (C-5), 18.9 (C-6), 45.1 (C-7), 38.9 (C-8), 62.8 (C-9), 35.9 (C-10), 25.3 (C-11), 27.1 (C-12), 57.0 (C-13), 138.3 (C-14), 121.9 (C-15), 23.8 (C-16), 49.6 (C-17), 37.7 (C-18), 36.7 (C-19), 24.1 (C-20), 81.1 (C-21), 37.1 (C-22), 28.1 (C-23), 15.7 (C-24), 15.4 (C-25), 19.8 (C-26), 56.0 (C-27), 13.4 (C-28), 15.8 (C-29), 27.5 (C-30), 171.1 (C=O), 21.3 (OCOCH3)。其光谱数据与文献［7］报道的3β-hydroxy-21α-acetoxy-14-serraten一致。

　　2.2.4  化合物4白色粉末，EI-MS m/z 472 ［M］+, 454, 439, 421, 332, 270, 237, 220, 203, 187。1H-NMR (400 MHz,C5D5N) δ：5.46 (1H,  brs, H-15), 3.65 (1H, brs, H-21), 3.36 (1H, dd, J = 12.0, 4.0 Hz, H-3), 1.69, 1.13, 1.02, 0.92, 0.85, 0.81 (s, 6×CH3)；13C-NMR (100 MHz, C5D5N) δ：39.7 (C-1), 29.4 (C-2), 78.2 (C-3), 49.4 (C-4), 57.0 (C-5), 21.3 (C-6), 45.6 (C-7), 37.3 (C-8), 62.5 (C-9), 38.9 (C-10), 26.7 (C-11), 27.7 (C-12), 57.3 (C-13), 139.0 (C-14), 122.9 (C-15), 24.6 (C-16), 43.8 (C-17), 36.4 (C-18), 31.8 (C-19), 25.7 (C-20), 75.3 (C-21), 38.0 (C-22), 24.8 (C-23), 180.9 (C-24), 14.3 (C-25), 19.8 (C-26), 56.8 (C-27), 13.9 (C-28), 22.2 (C-29), 28.7 (C-30)。其谱学数据与文献［5］报道的3β,21β-dihydroxy-14-serraten-24-oic acid（lycernuic acid A）基本一致。