补骨脂汤对痴呆大鼠海马NR2B、BDNF/TrkB表达的影响

                作者：郑里翔，崔志远，郭慧君，余世平

【摘要】  目的为探讨补骨脂汤对改善血管性痴呆大鼠的空间学习记忆的机理。方法用双侧结扎颈动脉反复灌注，用Morris试验测试大鼠的空间学习记忆，RT-PCR测定与学习记忆密切相关的NR2B、BDNF/TrkB基因表达产物。结果补骨脂汤高、低剂量组的逃避潜伏期都明显短于模型组（P<0.01），补骨脂汤高、低剂量，均可明显提高NR2B、BDNF/TrkBmRNA表达（P<0.05）。结论补骨脂汤能明显改善血管性痴呆大鼠的空间记忆，其可能的机制是通过提高NR2B、BDNF/TrkBmRNA表达水平而发挥作用的。

【关键词】  补骨脂汤；血管性痴呆；NR2B； BDNF/TrkBmRNA
Abstract：ObjectiveTo elucidate the mechanism of BuGuZhi Decoction how to improve vascular dementia rats on spatial learning and memory.MethodsExperimental VD model rats were subjected to the bilateral common carotid arteries ligation and reperfusion, the performance of spatial learning and memory of  all rats were measured using the Morris Water Maze.We studied the level of NR2B、BDNF/TrkB mRNAs in the hippocampus of rats by RT-PCR technique. ResultsBuGuZhi Decoction could significantly shorten the escape latency time in place navigation test，increase the number of passing through primary flat place in spatial probe test（P<0.01）. The level of NR2B、BDNF/TrkB mRNAs in the BuGuZhi Decoction group were markedly higher than those of the model group and the sham operation group（P＜0.05 or P＜0.01).ConclusionBuGuZhi Decoction can improve the spacious learning-memory.The mechanism may  enhance the expression level of NR2B、BDNF/TrkB mRNAs .

　　Key words：BuGuzhi Decoction;  Vascular dementia;  NR2B;  BDNF/TrkB

    随着人类的寿命日趋延长,老年性痴呆的患病率也逐渐增加，该病严重影响老年人的生活质量，引起了医疗界的广泛关注。在我国常见的老年性痴呆主要是血管性痴呆(VaD)。血管性痴呆是由一系列脑血管因素导致脑组织损害所引起的痴呆的总称，为一种进行性疾病，预后不良,国内外学者一直进行研究以图改善病人症状，提高生活质量，延长寿命。西医治疗本病存在局限性，而中医治疗本病疗效显著，可以明显改善生活质量，因此，得到广泛认可。根据该病的成因和临床表现，中医辨证认为病位在于脑，涉及肝、肾、心、脾，病因病机为本虚标实。本虚即气虚、肾虚；标实为气滞、血瘀、浊毒、火盛。往往因虚致使痰瘀浊毒留于脑窍，形成巢囊，脑气与脏气不相接续而致病［1～3］。故本实验以此病因病机为依据，初步研究发现补骨脂汤能明显改善血管性痴呆大鼠空间的学习记忆，但其作用机理目前尚不清楚，故本实验将从空间学习记忆密切相关的的NMDAR2、BDNF/TrkB基因表达产物入手，进一步阐明作用途径，为其临床应用提供实验依据。

　　1  材料与仪器

　　1.1  动物实验动物选用SD大鼠60只(购于南昌大学医学院动物中心)，雌雄各半，体质量160～180g。

　　1.2  中药由江西中医学院附属医院药房提供。

　　1.3  仪器及试剂水迷宫实验装置，PCR扩增仪,核酸电泳槽，DPG-900型凝胶图像分析系统，净化台，DYY-5型电泳仪。Trizol及Taq酶均自美国Invitrogen公司，其他化学试剂都是国产试剂。

　　2  方法

　　2.1  分组把60只大白鼠随机分成5组，每组雌雄各半，分别为假手术组，模型组，中成药组，补骨脂汤低剂量组，补骨脂汤高剂量组。

　　2.2  造模在造模前补骨脂汤高、低剂量组用补骨脂汤灌胃7 d，第8天对5组进行手术造模，用2﹪的戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，75﹪酒精消毒颈前皮肤，颈正中切口分离双侧颈总动脉穿线备用，用无创动脉夹夹闭一侧颈总动脉10min,去夹后立即关闭另一侧颈总动脉，每侧夹闭1次，每次10min，去动脉夹撤线缝合皮肤，在手术部位撒一层青霉素粉末。假手术组只进行颈总动脉的分离不夹闭血管，各组手术造模后待大鼠苏醒然后放回笼中保温饲养。

　　2.3  给药方法

　　术后第3天开始给药，中成药组剂量予银杏叶片7.2mg/(kg·d),补骨脂汤低剂量组剂量予9.82mg/(kg·d)，高剂量组剂量予19.64mg/(kg·d)，2次/d，连续25d。

　　2.4  Morris实验

　　将大鼠面向池壁置于象限1/2弧度处入水，经120s未找到站台的大鼠，将其引至站台停留10s,引导其学习记忆，各组大鼠每天训练2次，共训练6d，记录大鼠找到平台的确切时间。在整个实验中，实验者要与动物视线隔开，室内要保持安静及周围环境的相对稳定。