补益肝肾中药对更年期抑郁症大鼠模型行为学的影响
作者：肖爱娇，黄景斌，庄剑青
【摘要】 目的制备更年期抑郁症大鼠模型，观察补益肝肾中药对大鼠模型行为学测试结果的影响，了解补益肝肾中药防治更年期抑郁症的效果。方法采用雌性SD大鼠，在卵巢切除术的基础上，联合孤养和21 d慢性不可预见性的温和刺激（CUMS）制备更年期抑郁症大鼠模型。以Open-Field测试大鼠的直立活动和水平活动得分；以1 h内大鼠摄入饮用水及蔗糖水量计算糖水消耗百分比；以Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆力。结果行为学测试方面：中药组大鼠水平活动得分和直立活动得分均有所上升；糖水消耗百分比升高；学习记忆力有所增强。结论补益肝肾中药具有防治更年期抑郁症的效果。
【关键词】 慢性不可预见性的温和刺激 ； 更年期抑郁症； 行为学测试
更年期抑郁症是诸多抑郁症中的一种类型，是特指初次发病于更年期（也称为围绝经期，是指从卵巢功能紊乱到绝经后1年），以焦虑不安和情绪低落为主要症状的疾病，属于情感性精神障碍［1］，同时伴有思维迟缓、意志活动减退等症状，即存在认知功能障碍。据调查，更年期与抑郁症的高发病率有密切关系。［2］现代医学对更年期抑郁症的治疗包括激素替代疗法［3］以及采用激素替代和抗抑郁药联合［4］等方案。使用以上这些药物，在短期内症状缓解明显，但其产生的副作用是一个不容忽视的事实，如雌激素替代疗法造成的子宫内膜癌、乳腺癌等［5］以及抗抑郁药物引起单胺类递质合成障碍，抑制性功能的副作用等。中药对更年期抑郁症有一定的治疗效果。
补益肝肾中药更年方是临床上用于治疗妇女更年期抑郁症的基础方，该方的基本组成为知母、黄柏、巴戟天、仙茅、仙灵脾等，临床上在辨证论治的基础上使用此方加减治疗妇女更年期抑郁症，具有较好的效果。然而对此方的实验研究却未见报道。因此，本文采用雌性SD大鼠，在卵巢切除术的基础上，联合孤养和21 d CUMS制备更年期抑郁症大鼠模型，观察补益肝肾中药对更年期抑郁症大鼠模型行为学的影响，了解该方的防治效果，为下一步探讨补益肝肾中药防治更年期抑郁症的作用机制提供实验基础。
1 材料与仪器
1.1 动物SD大鼠27只，雌性，2～3月龄，由上海中医药大学动物实验中心提供，合格证编号：SCXK（沪）2003-0002。适应性喂养1周后，采用随机数字表将大鼠分为去势组、模型组和中药组，每组9只。去势组4只/笼或5只/笼，正常饮食进水，行卵巢切除术，不给予任何刺激。模型组1只/笼，进行卵巢切除术，术后正常饲养3周后接受21 d CUMS。中药组1只/笼，进行卵巢切除术，术后正常饲养3周后接受21 d CUMS，每次应激结束后，撤除一部分饲料，放置药物，任其自由取食，连续21 d。
1.2 中药处方及制备补益肝肾中药由知母、黄柏、巴戟天、仙茅、仙灵脾、女贞子、旱莲草、远志、枣仁、淮小麦、红枣、炙甘草、当归组成，实际上包含二仙汤、二至丸等经典方。大鼠每日用量为人的千克体质量20倍量。煎煮的滤液含生药3.722 g/ml，放置于4℃冰箱中保存备用。
1.3 仪器敞箱（自制），Morris 水迷宫视频跟踪分析系统（成都泰萌科技有限公司）。
2 方法
2.1 动物模型制备
2.1.1 卵巢切除术大鼠经1%戊巴比妥钠（40 mg／kg）腹腔注射麻醉，行双侧卵巢切除术。手术后使其休息3周。
2.1.2 慢性不可预见性的温和刺激按Willner 等［6］稍改进，将动物每周随机给予夹尾、禁水、禁食、昼夜颠倒、水平振荡、电击、4℃冰水游泳等方法刺激，每日采取1种方法进行刺激，连续21 d。
2.2 大鼠体质量称量 于适应1 d、应激第1天、应激第7天、第14天及第21天，进行称量。
2.3 大鼠行为学测试
2.3.1 Open-Field测试
于适应1 d、应激第1天、应激1周及应激3周时，用自制的敞箱进行测试。以动物穿越方格数作为水平活动得分（crossing），动物穿越1格为1次，如动物沿线行走，每10 cm为1次。以直立次数为垂直活动得分（rearing），以两前肢离地为1次。每只动物测定1次，3 min/次。保持环境安静，每次测试前保持敞箱内干净。
2.3.2 蔗糖水摄入量
于应激1 d、1周及3周时（即应激结束后1 d）进行测试。各组动物同时放入饮用水和1%蔗糖水，1 h后称量各只大鼠的饮用水量及蔗糖水消耗量，计算糖水消耗百分比。
2.3.3 学习记忆力测试
应激结束后1～5 d采用Morris水迷宫进行测试。水迷宫测试时，2次/d，上午9:00～11:00进行。将测试时间设置为70 s，操作者随机将大鼠从非平台所在象限的其他两个入水点将大鼠面向池壁放入水中, 观察并实时记录大鼠在70 s内找到并爬上平台所需的时间，即逃避潜伏期（escape latency），大鼠如果在70 s内仍未找到平台，则将其牵引至平台停留10 s, 引导其学习记忆，潜伏期记为70 s。逃避潜伏期时间越短学习记忆力越好。同时根据大鼠在水中搜索平台的游泳轨迹确定其每次的搜索策略。寻找平台的策略分为边缘型、随机型、趋向型和直线型。直线型以大鼠入水后的第1个点和平台之间的连线为中轴，若大鼠的所有运动轨迹点与中轴的距离均不超过一定范围，该运动策略即为直线型。趋向型与直线型相似，只是运动轨迹与中轴的距离取得更大。边缘型是以大鼠运动区域的中心为圆心，取一定半径作一个圆，如果大鼠的大部分运动轨迹点均在圆外，则认为此运动轨迹为边缘型。如果大鼠的运动策略不是以上3种则认为是随机型。
2.4 数据处理
采用完全随机设计方法，以±s表示。计量指标满足条件用方差分析进行检验，用统计软件SPSS12.0进行检验，以P﹤0.05作为显著性差异的标准。
