紫外分光光度法测定两面针中总生物碱的含量
【摘要】 ：目的 建立紫外分光光度法测定两面针中总生物碱含量的方法。方法 采用紫外分光光度法,以氯化两面针碱为对照,在329 nm波长处进行含量测定。结果 线性范围为3～8 μg/mL,回归方程：Y＝97.746X－0.025 5,r＝0.999 1(n＝6)。氯化两面针碱的平均回收率为99.5%,RSD＝2.32%(n＝5)。结论 方法简便、提取完全、重现性好、结果准确。
【关键词】 两面针 生物碱 含量测定 紫外分光光度法
Abstract：Objective To establish a simple method for determination the Alkaloids contents from Zanthoxylum nitidum. Methods Adopting nitidunechloride as reference, alkaloids in Zanthoxylum nitidum were by ultraviolet spectrophotometry at 329 nm. Results The liner arrange was 3～8 μg/mL, regression equation：Y＝97.75X－0.025 5, r＝0.999 1 (n＝6). The mean recovery of Nitidunechloride was 99.46%, RSD＝0.93% (n＝5). Conclusion The method performed is accurate and simple. The reproducibility and rate of extraction are also desirable.
Key words：Zanthoxylum nitidum；Alkaloids；content determination；ultraviolet spectr-ophometry
两面针[Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.]为芸香科花椒属植物,在我国主要分布于福建、广东、广西、云南等地,是民间常用的一种植物药。其根、根皮及茎皮入药,具有抗肿瘤、镇痛等作用。主治风湿性关节痛、牙病、胃痛、咽喉肿痛、毒蛇咬伤等症。两面针中主要含生物碱,且主要为苯并菲啶类生物碱[1]。目前文献尚未有对其总生物碱进行含量测定的报道。本试验建立了以紫外分光光度法测定两面针中生物碱类化合物含量的方法。
1 实验材料
仪器：Lambda 25型紫外/可见分光光度计[珀金埃尔默仪器(上海)有限公司]；KS-600D 超声清洗器(宁波科生仪器厂)；AG285电子分析天平(德国梅特勒公司)。
试剂：XDA-5大孔吸附树脂(西安蓝晓科技有限公司)；氯化两面针碱(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号848-9901)。所用试剂均为分析纯。
药物：两面针药材饮片分别购自桂林、南宁、玉林各产地。
2 方法与结果
2.1 测定波长的选择
取氯化两面针碱对照品,加95%乙醇溶解制成7 μg/mL的
溶液,置1 cm吸收池中,以95%乙醇液为空白,在250～500 nm波长范围内扫描。另取两面针药材提取液,照“2.3”项方法处理,稀释至一定浓度,置1 cm吸收池中,在250～500 nm波长范围内扫描,对照品及两面针提取液在329 nm处均有最大吸收,并且在328～331 nm处峰型较平坦,有利于测定,故选择329 nm作为测定波长。见图1。
2.2 线形关系考察
分别精密移取氯化两面针碱标准溶液(0.1 mg/mL)0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2.0 mL,用乙醇定容至25 mL容量瓶中。按“2.1”项方法操作,于329 nm波长处测定吸收度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝97.75X－0.025 5,r＝0.999 1(n＝6)。结果表明,样品液在3～8 μg/mL之间呈线性关系。
2.3 供试品的制备
2.3.1 提取方法
精密称取两面针药材粉末0.1 g(过100目筛),置锥形瓶中,加25 mL 60%乙醇,超声30 min(工作频率25～40 MHz),抽滤,重复1次,合并滤液,减压回收乙醇,加pH为3的酸水溶解,过滤,酸滤液再用等体积乙酸乙脂萃取2次,除去香豆素、木脂素等脂溶性杂质。
2.3.2 大孔吸附树脂纯化工艺
2.3.2.1 大孔树脂预处理
精密称取XDA-5型大孔树脂2 g, 95%乙醇湿法装玻璃层析柱(1 cm×50 cm),继续用95%乙醇在柱上淋洗,不时检查流出的乙醇,至与水混合(1∶5)不呈白色浑浊为止。最后用蒸馏水洗去层析柱中的乙醇,备用。
2.3.2.2 吸附洗脱分离工艺
将提取液上柱,流速控制20 mL/h。泄漏液无生物碱阳性反应,说明总生物碱已全部吸附。将已吸附好样品的XDA-5树脂先用50 mL水洗脱除去无机盐、蛋白质、多糖等杂质,再用50 mL 95%乙醇洗脱,流速控制20 mL/h,接取95%乙醇的洗脱液,最终定容至50 mL,即得供试品溶液。
2.4 精密度考察
在同一样品液中分别精密移取5份,于329 nm波长处测定吸收度,计算含量。分别为6.24%、6.12%、6.23%、5.98%、6.00%,RSD＝2.01%(n＝5)。