高效液相色谱法测定祖师麻中3种苯丙素成分的含量

　　2.2  对照品溶液的制备

    精密称取各对照品适量,置10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。再精密吸取2 mL,置10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得含瑞香素277 μg/mL、7-OH香豆素77.2 μg/mL、紫丁香苷274.7 μg/mL的混合对照品溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备

    精密称取样品粉末0.5 g,置于250 mL磨口三角瓶中,精密加入50%甲醇50 mL,称定重量,超声处理30 min,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。作为供试品溶液。

　　2.4  方法学考察

　　2.4.1  线性关系考察 

　　分别精密吸取“2.2”项下的混合对照品溶液0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、10 mL各置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制得混合标准溶液系列,按“2.1”项下的色谱条件,各取10 μL进样,测定。以对照品浓度对峰面积平均值作图,经回归分析：瑞香素：Y＝78.89X－35.90,r＝0.999 7,线性范围0.027 7～2.77 mg；7-OH香豆素：Y＝134.4X－7.666,r＝0.999 9,线性范围0.007 7～0.772 mg；紫丁香苷：Y＝46.91X－4.047,r＝0.999 6,线性范围0.027 5～2.747 mg。结果表明：各对照品在各自的线性范围内呈良好线性关系。

　　2.4.2  精密度试验

　　 精密吸取混合对照品溶液1.0 mL于10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制得混合对照品溶液,取10 μL进样,重复6次,以各组分的含量分别计算RSD,结果瑞香素RSD＝0.74%、7-OH香豆素RSD＝1.01%、紫丁香苷RSD＝1.50%,表明本试验仪器的精密度良好。

　　2.4.3  稳定性试验 

　　精密吸取新配制的供试品溶液,按样品含量测定法每隔2 h按10 μL进样测定,以各组分的峰面积分别计算RSD,结果均小于3%,表明供试品溶液在室温条件下10 h内稳定。

　　2.4.4  加样回收率试验 

　　精密称取已知含量的祖师麻0.5 g,平行9份,分别按样品量的80%、100%、120%加入标准品,每个平行3份,按供试品溶液制备方法制成加样回收样品液。按10 μL进样,计算加样回收率。结果见表1～表3。表1  瑞香素加样回收率试验结果(略)表2  7-OH香豆素加样回收率试验结果(略)表3  紫丁香苷加样回收率试验结果(略)
  

　　2.5  样品含量测定
   
　　按“2.3”项制备供试品溶液,进行含量测定。结果见表4。表4  样品含量测定结果(略)

　　3  讨论

    分别对本试验中的3个对照品溶液进行紫外全波长扫描,瑞香素、7-OH香豆素、紫丁香苷的最大吸收波长分别为327、327、266 nm,故本试验采用双波长法,同时测定3种成分的含量。在此条件下,所需检测的各峰分离度及峰形均佳,灵敏度也较高。为使所测瑞香素、7-OH香豆素、紫丁香苷3种成分提取完全,对供试品溶液制备方法进行了考察,结果以50%甲醇提取最完全,故确定50%甲醇为提取溶剂。
   
　　药材生长受产地、气候和生态环境等的影响较大,因此,仅针对其中某一个成分进行定性定量分析,并不能有效地控制药材或中成药的质量。本试验所建立HPLC双波长法同时测定祖师麻药材中3种苯丙素成分的含量,可为祖师麻药材的质量评价和控制提供参考。