何首乌生品与炮制品薄层层析鉴别方法研究

　　2.3  薄层层析条件
  
　　依2005年版《中华人民共和国药典》(一部)薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液和对照品溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以15%α-萘酚乙醇溶液,在90 ℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。不同炮制方法、相同炮制方法不同炮制时间、不同地区制何首乌色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的紫红色斑点,何首乌生品色谱都没有显示相同颜色的斑点。结果见图1～图3。

　　3  讨论

    由于缺乏统一的炮制规范,全国各省市何首乌炮制方法有多种,有黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸,还有高压蒸[4]等,炮制时间由3 h到40 h不等。不同炮制方法TLC图谱结果显示,采用黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸以及高压蒸法制备的制何首乌样品,在与5-HMF色谱相应的位置上,都显示相同颜色的斑点,而何首乌生品没有显示相同颜色的斑点(见图1)。何首乌采用黑豆汁炖8、16、24、32、40 h得到的不同炮制时间的样品,TLC图谱结果显示,与5-HMF色谱相应的位置上,都显示相同颜色的斑点,并且随炮制时间延长,在点样量相同的情况下,斑点的大小逐渐增大(见图2),表明制何首乌中的5-HMF含量随炮制时间延长逐渐升高,与HPLC含量测定的结果一致(结果另文报道)。不同地区采集或采购的3个批次的何首乌生品与10个批次的制何首乌样品TLC鉴别结果显示,在与对照品色谱相应的位置上,制何首乌显示相同颜色的斑点,但各批次相应斑点的大小有一定差异,表明不同地区制何首乌中5-HMF含量存在明显差异,而3个批次的何首乌样品在相应的位置上,没有显示相同颜色的斑点(见图3)。本结果表明,所建立的TLC鉴别方法可以用于区别何首乌与制何首乌。

    在方法建立过程中,首先参照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)熟地黄鉴别项下有关5-HMF的TLC方法进行[1],供试品采用乙醇提取,结果显示,制何首乌与5-HMF对应位置斑点不很清晰。表明制何首乌中5-HMF含量不及熟地黄中高。参考何首乌中5-HMF提取分离方法[3],采用乙醇提取后用乙酸乙酯萃取,结果10个批次的制何首乌样品有6个批次在与5-HMF对应位置有较清晰的斑点,但由于蒽醌类成分的存在,有一定背景干扰。改用乙醇提取聚酰胺柱纯化方法,得到了理想结果。试验过程中还比较了2种TLC条件,一种是硅胶GF254薄层板,紫外光灯(254 nm)下检视；另一种是硅胶G薄层板,喷以15%α-萘酚乙醇溶液,在90 ℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。结果表明,后者制何首乌斑点更清晰,因此采用后一种鉴别条件。斑点的颜色随加热时间由紫红色变成摹仿蓝紫色。

    根据2005年版《中华人民共和国药典》(一部)的鉴别方法,可以判断是否为何首乌或其炮制品。在本试验建立的TLC方法,可以实现区别何首乌生品与其炮制品,并且在一定程度上可以根据斑点颜色、大小的对比判断炮制的完善程度。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.122,83.

　　[2] 刘振丽,李林福,宋志前.何首乌炮制前后高效液相图谱的变化[J].中草药,2005,36(11)：1622.

　　[3] 刘振丽,李林福,宋志前,等.何首乌炮制后新产生成分的分离和结构鉴定[J].中药材,2007,30(12)：1519.

　　[4] 天津市卫生局.中药饮片切制规范[M].南昌：江西科学技术出版社, 1975.53.